人脑乙酰胆碱酯酶的分离纯化及特性

人脑纹状体及部分丘脑AChE在低盐缓冲液中以1％Triton X-100溶脱后,经Con A、短臂及长臂凝胶配基亲和层析纯化在还原条件下SDS-PAGE呈一主带,纯化的AChE比活性可达3384U/mg,产率20％,其单体分子量66 kD,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示有单体及二、四、六、八聚体存在,等电点在pH5.3—6.0之间,人脑AChE活性大部分能用Con A亲和层析法回收说明为糖蛋白,纯化的人脑AChE与抗电鳐电器官AChE单克隆抗体3F3无抗原抗体反应,而与IH11及2G 8有弱的交叉反应,以Con A及短臂凝胶配基亲和层析纯化的人小脑AChE为抗原免疫Balb/c小鼠产生的抗血清与电鳐电器官AChE有较强的免疫交叉反应而与人红细胞膜AChE反应较弱,纯化的人脑AChE经还原羧甲基化及TPCK处理的胰蛋白酶切割后,再用反相HPLC分离,显示几个大肽峰及许多小肽峰,几个大肽峰以ELISA法测定有抗原性。     

用铜（Ⅱ）—L—精氨酸配体交换薄层色谱拆分氨基酸对映体

报道了一种新的配体交换薄层色谱拆分氨基酸对映体的方法。以醋酸铜－Ｌ－精氨酸的络合物为配体交换剂，用浸渍的方法吸附在硅胶薄层板上，制成配体交换薄层，用ＰＲＩＳＭＡ优化法选择出展开剂的最佳组成为：甲醇／乙腈／四氢呋喃／水＝８０：８．２：５．８：６，在此色谱条件下，十对氨基酸对映体得到良好的分离，Ｄ－和Ｌ－氨基酸的相对比移值在１．０９－２．４０之间。文中对配体交换薄层的制备方法，样品的分子结构及色谱行为     

猪肝酯酶在不对称合成中的应用

猪肝酯酸PLE(Pig Liver Esterase)对双酯具有特殊的不对称水解性,而且可获得高产率和高光学纯的不对称水解产物。本文简要介绍PLE作为一种有效的酶催化剂,在温和的条件下,对双酯的不对称水解反应和在不对称合成中应用的近况。     

聚乙烯醇缩丁醛膜涂丝酶电极构造方法的研究

本文以三月桂胺为中性载体制成聚乙烯醇缩丁醛膜涂丝pH电极,再以该pH电极为换能器,采用三种共价交联固定化酶方法制成涂丝乙酰胆碱酯酶电极。该酶电极能用于测定0.1～10mmol/L浓度范围内的乙酰胆碱,响应时间在3～6min之内,寿命可达两个多月。     

ATP与对甲基苯磺酰-L-精氨酸甲酯盐酸盐的弱相互作用光谱法研究

本文分别使用荧光猝灭光谱法、荧光滴定实验及FT-IR光谱法对腺苷-5´-三磷酸（ATP）和对甲基苯磺酰-L-精氨酸甲酯盐酸盐（TAME）的相互识别作用做了系统的研究，并得出了一些有意义的结果。在荧光实验中，发现TAME对ATP有很强的荧光猝灭作用，同时为了进一步验证TAME与ATP的相互作用又利用红外光谱法，推测出两者的识别作用位点是在TAME的主链胍基和ATP的磷酸根基团上，结合力为氢键和静电相互作用力。另一方面，本文又分别考察了TAME同ADP和AMP的作用，用Stern-Volmer方程分别计算出相应的猝灭常数，发现TAME与ADP和AMP的作用非常弱，说明TAME对ATP的识别作用有较强的选择性。这种识别作用的发生，对深入理解在ATP合成和水解过程中，ATP合酶中精氨酸残基如何起到“触点”的作用有一定的参考价值。     

利用稀土位移探针对水溶液中L-精氨酸构象的~(13)C-NMR研究

采用重稀土离子(Dy、Ho、Er、Tm、Yb)研究了水溶液中L-精氨酸的构象。结果表明,距稀土配位中心4个或4个键以上的配体核的接触位移都很小,在稀土离子附近的配体核具有显著的接触位移。通过对配体磁性核结构因子的实验值进行模拟,建立了水溶液中L-精氨酸的整体构象。在L-精氨酸稀土配合物中,配体的羧基与稀土离子配位,配体的骨架结构位于稀土离子的零偶极位移锥面的外侧。对于羧基的双齿配位模式,计算得到的RE~(3+)-O键长为0.21nm。在溶液中配体以伸展状态存在,分子骨架呈全反式构象。     

电动流动分析和酶抑制法测定池塘水中农药残留折合总量

用电动流动分析和酶抑制法测定池塘水中有机磷和氨基甲酸酯农药残留折合总量。电动流动分析系统由一台自制电渗泵和4个电磁切换阀组成,由计算机编程控制。酶抑制法用面粉酯酶,有机磷和氨基甲酸酯农药作酶抑制剂,底物的酶解产物与显色剂反应,用分光光度计在524 nm检测。有机磷和氨基甲酸酯农药的折合浓度对数线性范围为0.02~0.20 mg/L乐果,检出限为0.01 mg/L乐果,每小时可测24个样品。氨基甲酸酯在80℃完全水解,而有机磷部分水解,据此可判断农药类别。     

原子吸收硫化锌法间接测定精氨酸络合反应的机理研究

通过编程计算精氨酸和锌离子在不同pH条件下的各种存在形式,通过分析拟合分布图,研究了在硫化锌法原子吸收间接测定精氨酸时的pH对原子吸收响应的影响及络合反应的机理.经对不同形态的精氨酸与金属锌离子的共存区域的各种组合探讨,指出在pH 9.0左右最佳测定条件下的pH响应峰是由于精氨酸和锌离子的两种不同存在形式的变化所引起的左右峰边缘,精氨酸是以正一价荷电形态的精氨酸基Arg -与Zn(OH)2形成了可溶性络合离子[HN=CH(NH 3)-NH-(CH2)3-CH(NH 3)-COO]2Zn(OH)2.结果表明,理论分析计算的结果与实验数据得到了基本吻合,确定了硫化锌法原子吸收间接测定精氨酸时的络合物反应机理及络合物的组成结构.     

二水合氯精氨酸的构象变化

以X光衍射实验对二水合氯酸的晶体结构进行了研究,重点讨论了影响精氨酸构象变化的主要因素并比较了在不同阴离子存在条件下精氨酸构象的变化情况。该晶体为单斜晶系,P21/c,a=11.0490(18);b=8.4876(13);c=11.2261(17);β=91.386(2);°Z=4;Dx=1.443Mg.m-3。精氨酸分子以顺式和反式两种构象沿C轴方向交错排列而羧基氧原子和相邻分子中的α-氨基N-H以氢键相连,形成常见的“头尾”相连构型;分子中的结晶水参与氢键的形成,类似“盐桥”作用;氯离子参与电荷平衡并和精氨酸的N-H形成较强的氢键作用和静电吸引力。上述作用使得精氨酸分子晶体形成了三维氢键网状超分子结构。