石英芯片电泳分离检测尿中蛋白的研究

通过对缓冲体系、缓冲液浓度、酸度、乳酸钙浓度、乙胺浓度、电泳电压和进样时间的优化选择，用石英芯片电泳一紫外检测法分离了纯人白蛋白和人运铁蛋白；在75mmol／L硼酸盐（pH10．55）（含0．8mmol／L乳酸钙、1％（φ）乙胺）运行缓冲液中，上述两组分在3min内完全分离；纯人白蛋白和人运铁蛋白的线性范围分别为1．0～15．0g/L和1．0～10．0g／L；检出限（S／N=3）均为0．5g／L，应用于临床尿蛋白分离测定，并与Helena琼脂糖凝胶电泳仪电泳结果进行比较，获得一致结果。     

可逆电泳芯片制作及在临床尿蛋白检测上的应用

报道了一种可逆键合电泳微芯片的制作方法,以及该微芯片在临床尿蛋白检测上的应用.结果表明,本方法可在一定程度上减少因泳道堵塞而导致的材料浪费,降低了实验成本.     

磺氯酚N-Cu(Ⅱ)-HSA-OP体系对尿蛋白的测定

室温下,在pH 3.0的Britton-Robinson缓冲介质中,磺氯酚N与Cu2+生成淡蓝色配合物,配合物与蛋白质发生反应形成多元深蓝色复合物,λmax为724 nm,相比于磺氯酚N红移了174 nm.初步探讨了反应机理,研究了反应体系的光谱性质及其影响因素,确定了最佳实验条件,建立了以多元反应为基础测定蛋白质的新...     

微量样本中N-糖组分析技术的发展与应用

针对糖组学分析面临的初始样本量需求较高的技术挑战,该研究发展了一种微量样本N-糖链制备技术(GPAT),通过在移液枪头(Tip)中分别装填C_(18)和HILIC填料,实现了一站式原位蛋白消化、N-糖链释放和富集。与目前普遍采用的基于过滤辅助样品制备(FASP)技术的N-糖组分析策略相比,使用GPAT技术可以实现微量免疫球蛋白G(IgG)和人肝癌HepG2细胞提取蛋白的原位N-糖链的释放和富集,样本起始量减少90%,可以从10μg IgG和10μg的HepG2细胞蛋白中分别检测到20条和39条N-糖链。从6例健康人(3例男性,3例女性)尿液中提取的10μg尿蛋白中检测到49条N-糖链。该方法实现了微量复杂蛋白样本N-糖链简便、快速的定量分析策略,为进一步的糖组学方法推广应用奠定了基础。     

微流控芯片电泳电导检测分离分析尿蛋白

基于自行构建的微流控芯片电泳集成非接触式电导检测分析系统,建立了一种集进样、分离与检测为一体的微流控芯片电泳电导检测蛋白质的方法,并用于人白蛋白(HSA)和人转铁蛋白(TRF)两种尿蛋白的分离分析以及肾病综合症病人尿液中白蛋白的定量检测.考察并优化了缓冲液、分离电压、进样方式、进样时间等电泳分离的影响因素,在缓冲液为p...     

蛋白质印迹模板的制备及在尿液蛋白测定中的应用

以牛血清蛋白(BSA)为分子模板,甲基丙烯酸(MAA)为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDGMA)为交联剂,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,制备了BSA分子印迹模板,研究了该模板对BSA的吸附性能,并以其作为净化材料去除人尿中的干扰物质,测定了人尿中的蛋白质。结果表明:蛋白质模板吸附和洗脱的最佳pH值分别为5.3和5.6,最佳吸附时间为2h,最大吸附容量为72mg/g。三种人尿样品中蛋白质的含量分别为35.4、18.9、24.2mg/L,回收率为92.4%~103.7%。该方法可用于人尿中蛋白质含量的测定。     

毛细管电泳微芯片在临床尿蛋白检测中的应用研究

用微芯片毛细管电泳法对临床患者尿蛋白进行了分离, 初步探讨了用于判断肾损伤的应用前景. 以pH 10.3, 75 mmol•L^－1的硼酸盐缓冲液作为芯片电泳缓冲体系, 利用蛋白质的紫外吸收特性, 在210 nm波段检测吸光度并进行信号收集和分析. 研究两种添加剂对提高尿蛋白分离效率的影响, 分析了肾病综合症、妊娠高血压症、风湿性心脏病和多发性骨髓瘤等患者尿样本, 并与美国Helena电泳系统分析结果对比, 得到了较一致的结果.     

灵敏的单一溴酚蓝测定尿蛋白

在pH 3.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中,用溴酚蓝作显色剂,建立了一种快速、简便、灵敏、稳定的测定尿蛋白的分光光度法。该法显色络合物的最大吸收波长为620 nm,线性范围0~4.0 g/L,批内变异系数为0.52%,批间变异系数为1.27%,日间变异系数为1.51%,回收率为98.0%~99.3%,与邻苯三酚红比较有良好相关性,回归方程为y=0.030 0.830x,相关系数为r=0.9798。     

一种可逆键合电泳微芯片的制作及在蛋白质分离中的应用

阐述了一种可逆键合电泳微芯片的制作方法, 以及电泳微芯片在蛋白质分离、临床尿蛋白检测方面的应用. 用标准光刻腐蚀技术在石英基片上腐蚀泳道, 清洗腐蚀好的基片和盖片后, 在真空条件下实现键合. 此种方法键合制作的电泳微芯片可重复键合使用, 制得的电泳微芯片成功地用于标准蛋白质分离以及临床尿蛋白分析.