中国小型猪骨髓间充质干细胞的蛋白质组研究

报道了骨髓间充质干细胞(MSCs)的蛋白质组表达研究。从体外培养的MSCs提取细胞蛋白,经二维电泳分离后用银染方法可检出蛋白点约1600个,选取48个蛋白点进行胶内酶解及质谱分析,经数据库检索成功鉴定了37个蛋白,并对蛋白功能进行初步分析。本实验数据为进一步分析MSCs增殖、分化或凋亡的分子机理提供相关信息。     

微流控芯片二维电泳研究进展

综述了微流控芯片二维电泳技术及其在生命科学中的应用,包括胶束电动力学毛细管色谱(MEKC)与毛细管区带电泳(CZE)、等电聚焦(IEF)与CZE、开管电色谱(OCEC)与CZE耦联等模式的二维微流控芯片。展望了二维微流控芯片的应用前景。     

微流控二维电泳芯片的电压控制优化

基于微流控二维电泳芯片(2D-EMC)的流路特点,建立等效电阻模型,以便给出各端电压的合理取值范围,成功实现微流控芯片二维电泳分离.经实验测定各微通道电阻,在各端电压合理取值范围内,通过电流测量调整(优化)电压,得到了一组优化的电压控制方案,在化学发光-2D-EMC系统中成功实现了精氨酸和甘氨酸衍生物的二维分离.本方法显著减小了实现微流控芯片二维电泳分离的实验次数.     

含有二氧化钛薄膜增强虚拟阀的微流控芯片用于二维凝胶电泳分离

在微流控芯片上进行二维电泳,能够有效缩短分析时间、减少试剂和样品消耗,并实现高通量分析,但需要隔离两维间不同的缓冲液体系,并能实现对蛋白的有效控制和传输。本研究在虚拟阀的基础上,通过两相界面上的水解反应,在两维微通道的接口处沉积一层二氧化钛薄膜,以增强虚拟阀的效果。分别对等电聚焦和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳过程进行了考察。等电聚焦耗时约5 min,然后经电转移进入第二维通道进行凝胶电泳分离。凝胶电泳过程需5~10 min,迁移率与分离时间线性相关,与蛋白质分子量的对数值成反比。在上述工作的基础上,对蛋白质混合物进行了差异二维电泳分离。     

哮喘大鼠淋巴细胞蛋白质组的分析

通过建立卵蛋白(Ovalbumin, OVA) 致敏的Wistar大鼠哮喘动物模型, 利用二维凝胶电泳及MALDI-TOF-MS分析技术, 对哮喘大鼠与正常大鼠脾脏淋巴细胞差异表达蛋白质进行鉴定和分析. 结果显示, 在哮喘组中呈现高表达的蛋白质, 包括胶原蛋白调控蛋白质(hnRNP)以及细胞结构蛋白(Fibrinogen). 而与代谢相关的蛋白质(CoQ10)和线粒体内膜蛋白, 在哮喘组中呈低表达. 研究结果表明, 这些蛋白质与哮喘气道慢性炎症、气道高反应性和气道的重构有关.     

富硒螺旋藻光谱特性及其含硒蛋白质组分析

以富硒螺旋藻( Selenium enriched spirulina platensis, Se-SP)为材料,采用红外、紫外-可见吸收光谱分析Se-SP的光谱特征,并利用二维电泳技术(Two-dimensional electrophoresis,2DE)分离、飞行时间质谱(Matrix assisted laser desorption ionization time of flight, MALDI-TOF)鉴定和电感耦合等离子体质谱( Inductively coupled plasma mass spectrometry, ICP-MS)检测硒含量,对Se-SP蛋白质组及其含硒蛋白质分布进行初步鉴定和分析。结果显示,硒对螺旋藻蛋白质组中多种蛋白质表达有一定影响,观察到对捕光色素蛋白如藻蓝蛋白( Phycocya-nin, PC)、别藻蓝蛋白( Allophycocyanin , APC)和 Robisco大亚基及超氧化物歧化酶( Superoxide Dismutase, SOD)等蛋白质具有明显上调作用。硒在Se-SP蛋白质组中存在较为普遍,但分布相对集中在pH 4~7、分子质量14.4~43 kDa的蛋白质中。硒在藻体特定蛋白质中的存在形式还有待深入研究和鉴定。     

顺铂对卵巢癌COC1细胞总蛋白表达的影响研究

对卵巢癌COC1细胞进行体外培养, 当培养至10⁹/mL浓度时裂解细胞, 获得细胞总蛋白, 利用二维电泳对顺铂诱导前后的细胞内总蛋白质进行分离, 利用PDQuest 7.1.1专业分析软件对二维凝胶图谱进行差异比较, 利用基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行质量分析, 最后进行生物信息学检索, 以寻找卵巢癌细胞发生、发展和凋亡的分子标记物. 经二维电泳图谱和质谱分析, 鉴定了11种蛋白, 4种蛋白表达量有差异, 7种蛋白在诱导前后表现为有和无的关系. 有5种是“分子伴侣”蛋白, 有4种蛋白与人体能量代谢有关. 蛋白功能分析提示卵巢癌细胞的蛋白质组表达存在差异, 这些差异蛋白对于寻找卵巢癌生物标志物, 开发新药提供很好的理论依据.     

大鼠急性心肌梗死模型比较蛋白组学的初步研究

建立了大鼠急性心肌梗死模型, 利用二维电泳（2DE）分离正常与梗死心肌组织的蛋白, 得到不同条件下的蛋白质组图谱. 在pH 5～8范围下采用银染方法通常可以检测出超过800个蛋白点. 对比正常心肌组织, 梗死组织31个蛋白表达上调, 18个蛋白表达下调. 我们选择其中具有显著性变化的18个蛋白进行质谱分析, 并通过数据库检索, 成功鉴定了其中的8个蛋白. 其中, Hsp27, HspB6, 超氧化物歧化酶[Cu-Zn], 阿朴脂蛋白A-I, 在急性心肌梗死发病过程中起重要的作用, 可以作为临床诊断的重要标志物, 为急性心肌梗死的治疗提供药物作用靶点.     

应用蛋白质组学方法分析猪晶状体不同区域上皮细胞中蛋白质的表达差异

应用蛋白质组学方法分析比较猪晶状体中央和周边上皮细胞的蛋白质表达差异。将32个正常猪晶状体前囊膜所附着于的上皮细胞分为中央和周边两部分，经二维凝胶电泳分离和凝胶考马斯亮兰染色，质谱（MALDI—TOF—MS）鉴定差异蛋白质斑点，并对鉴定的蛋白质进行分类。结果显示来自中央与周边区域的猪晶体上皮细胞的蛋白在二维凝胶上分别有801和886个蛋白质斑点，鉴定出差异表达蛋白84个：差异表达的蛋白质在功能上有一定趋向性，主要涉及代谢、细胞骨架、信号转导／细胞周期／转录因子等。