蛋白质酪氨酸硝化检测方法

蛋白质酪氨酸硝化是一种重要的蛋白质翻译后的选择性修饰,其产物3－硝基酪氨酸可以作为检测细胞和组织损伤的一个生物标志。本文详细介绍了分析检测蛋白质酪氨酸硝化的各种方法,主要包括免疫法、分光光度法、色谱法、质谱法、电泳法等,并对其检测方法的发展趋势进行了评述和展望。     

产漆酶真菌的筛选、培养及对苯酚的降解

提出了一种新的从土壤中筛选产漆酶真菌的方法．将51个土壤样品分别分散于无菌水中,接种至含有底物A的固体培养基上,培养3d后,当菌落周围的培养基变成褐色时表明该菌株可能产生漆酶．将筛选出的若干菌株与市购的几种真菌分别接种于LB液体培养基中培养7d后,测定培养液中漆酶的活性,表明从土壤样品中筛选得到的真菌L1产酶活性最高．研究了各种培养条件对真菌L1产漆酶能力的影响,并且对该漆酶的性质及其对苯酚的降解进行了研究．结果表明,从产漆酶真菌中筛选出的自选菌(L1),在苯酚作为诱导剂、30℃下PYGM培养基中培养7d,产酶活性最高．该漆酶的最适pH为8．0,最适温度为33℃,Cl^-对其活性抑制较大．该漆酶对浓度为(50-250mg／L)的苯酚有较好的催化降解效果,在24h内最大降解率可达60％以上．     

高糖和外源性硝化试剂导致人脐静脉内皮细胞蛋白质硝化的研究

采用细胞生物学及化学方法,检测了高浓度的糖和外源性硝化试剂作用于人脐静脉内皮细胞(ECV304)后所导致的细胞蛋白氧化损伤及硝化损伤.结果发现:高浓度的糖(30和40 mmol/L)可以导致细胞发生氧化损伤,主要包括降低细胞存活率、降低胞内还原型谷胱甘肽(GSH)的含量、增加胞内一氧化氮(NO)代谢产物亚硝酸盐和硝酸盐的含量;在细胞蛋白内也检测到蛋白质硝化的产物.研究发现:蛋白质硝化可以进一步加强细胞损伤的程度,而高浓度的糖和外源性硝化试剂导致的细胞蛋白硝化有所不同,其原因可能是在糖尿病血管并发症中蛋白质是有选择地发生硝化反应的.     

黄芩黄酮对自由基的清除作用的ESR研究

采用电子自旋共振法和自旋捕获研究中药黄芩中四种主要黄酮的自由基清除作用及可能的作用机理。结果表明黄芩素和黄芩甙对羟自由基，超氧阴离子自由基，烷过氧自由基及ＤＰＰＨ自由基有较强的清除作用，页汉黄芩素和汉黄芩甙在测定深度深度范围内对上述自由基作用较弱或无明显的清除作用。     

黄芩黄酮对自由基的清除作用的ESR研究

采用电子自旋共振（ＥＳＲ）法和自旋捕获技术研究了中药黄芩中四种主要黄酮（黄芩素、黄芩甙、汉黄芩素和汉黄芩甙）的自由基清除作用及可能的作用机理．结果表明黄芩素和黄芩甙对羟自由基、超氧阴离子自由基、烷过氧自由基及ＤＰＰＨ自由基有较强的清除作用,而汉黄芩素和汉黄芩甙在测定浓度范围内对上述自由基作用较弱或无明显的清除作用．黄芩素和黄芩甙的自由基清除活性大大高于汉黄芩素和汉黄芩甙的原因是其结构中含有邻二酚结构     

毛细管胶束电动色谱在线高盐堆积技术检测3-硝基酪氨酸

利用毛细管胶束电动色谱在线高盐堆积技术研究NaNO2-H2O2-氯高铁原卟啉(hemin)-酪氨酸(tyro-sine)体系中3-硝基酪氨酸(3-NT)的测定,建立了一种新的测定生物样品中微量3-NT的方法。最佳分离条件为:含SDS(30mmol/L)的Na2B4O7(36mmol/L)缓冲液(pH9.3),进样压力为3.4kPa,进样时间为30s,毛细管柱温度25℃,分离电压20kV,样品中NaCl100mmol/L。在此条件下,3-NT检出限为0.1μmol/L(S/N=3);线性范围为0.78～50μmol/L;线性相关系数为0.9953。保留时间日内与日间的RSD(n=5)分别为1.6%和2.8%,加标回收率为95.2%～103.1%;样品不同浓度添加水平的日内和日间的RSD(n=5)均小于3%。本方法简单、快速、灵敏度高,为直接分析生物样品中的微量3-NT提供了方法。     

微量元素铁与蛋白质酪氨酸硝化

蛋白质酪氨酸硝化是一氧化氮依赖的氧化应激的生物标志。蛋白质硝化将会直接影响蛋白质的催化活性、细胞信号传递和细胞骨架结构,导致相关病症的发生发展。本文介绍了铁在不同酪氨酸硝化途径中的作用,结果提示体内的微量铁对蛋白质硝化起着重要作用。     

磷酸盐缓冲体系中大豆卵磷脂的分析

建立了一种测定磷酸盐缓冲体系中大豆卵磷脂含量的方法。利用无水乙醇－石油醚（６０～９０℃）萃取剂从磷酸盐缓冲溶液中分离出大豆卵磷脂，再用钼蓝法对大豆卵磷脂含量进行测定。该方法操作简便，定量准确，重现性好，用于胰岛素口腔喷剂中大豆卵磷脂含量测定，样品平均回收率为９９．７５％，ＲＳＤ＝３．９３％。