桥序列在构建人工核酶M1GS中的作用

目的：为检验连接的Gs序列是否会影响M1RNA高级结构而导致M1RNA活性改变,对核酶的催化机制进行探讨。方法：通过软件模拟对M1GS进行结构分析,筛选了一段独立折叠的桥序列连接M1RNA与GS,并通过体外切割实验检验有桥和无桥序列的核酶的活性。结果：有桥序列的M1GS具备体外特异切割底物的核酶活性,而无桥序列的M1GS核酶未表现体外切割活性。结论：证实桥序列对维持M1RNA高级结构和保持人工核酶M1GS的体外切割活性具有重要作用。     

我国基因工程干扰素的研究概况

介绍了基因工程干扰素及其应用，以及影响基因干扰素产业化生产的因素，并对我国基因工程干扰素的发展历程、现状和前景作了阐述。     

温度变化对M1GS的结构和活性的影响

为研究M1GS的二级结构和活性随温度变化的规律,以人巨细胞病毒DNA聚合酶基因(UL54)为靶基因,构建了具有切割效率的核酶M1GS-T7。采用维也纳大学RNA二级结构预测与比较软件包分别对20℃,37℃,55℃的M1GS-T7进行二级结构模拟,并对20℃,37℃,55℃下的核酶的体外切割活性进行比较。软件模拟结果显示,对比37℃和20℃的M1RNA的结构,两者的碱基互补性存在明显差异,活性区域无法形成;对比37℃和55℃的M1RNA结构,两者只有M1RNA的活性中心存在差别,非活性部位改变较少。体外切割实验结果显示,20℃的M1GS-T7未显示体外切割活性,而55℃的M1GS-T7比37℃的M1GS-T7活性提高了30%。结果说明,活性部位的形成是核酶有活性的必要条件,且活性部位相对于非活性部位有较高的柔性。