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1.
从制备的~(125)I标记的牛血清白蛋白和人体DNA片段,分别进行了红细胞血影的装载试验,装载效率分别为3.7%和3.0%。装载试验有很好的重复性。通过仙台病毒介导将红细胞血影装载的~(125)I-人体DNA片段转入DON细胞内,经放射自显影注射率为58%。 相似文献
2.
mRNA二级结构对重组人白血病抑制因子(rhLIF)在大肠杆菌中表达的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
真细菌中翻译起始效率通常是由翻译起始位点两侧的m RNA 区域二级结构的稳定性决定的.这种稳定性与该区域RNA 二级结构的发生自由能(ΔG0 )相对应.重组人白血病抑制因子(rhLIF)为具有诱导白血病细胞分化、调节骨组织的生长代谢、维持胚胎干细胞的基本特征、促进神经元的分化等广泛生物学活性的细胞因子.为了获得高表达的LIF蛋白,通过翻译起始区的位点专一突变,把具有优选密码子和能量优势的lif 片段克隆入pJLA503 载体,然后转化至大肠杆菌中表达,得到表达量提高10 倍的重组LIF蛋白 相似文献
3.
半合成人肿瘤坏死因子cDNA的构建及其在大肠杆菌中的高表达 总被引:3,自引:0,他引:3
本文报道从人基因文库中分离淋巴毒素(LT)基因的同时,克隆了肿瘤坏死因子(TNF)基因,这两个基因相距1.2kb.TNF基因有4个外显子,第4外显子编码TNF成熟蛋白157个氨基酸中的140个.将第4外显子切出一部分,再人工合成编码其余氨基酸的DNA片段,两者连接构成重组的人TNF(rhTNF)cDNA,并克隆在大肠杆菌表达载体中成功地得到表达.5 l罐发酵得菌体约20g/l,以L929为靶细胞测定细胞毒活性为10~6-10~7单位/ml.高压液相色谱仪分离纯化rhTNF,冻干后得白色粉剂.测定了这种rhTNF的氨基端的10个氨基酸序列,证明与天然的人TNF完全相同.纯度约为95%. 相似文献
4.
质粒pEGFP-1是一种不含启动子序列的哺乳动物细胞表达载体,将系列缺失的TNFα基因启动子5‘UTR(untranslated region)和3‘UTR插入pEGFP-1中,构建了一组重组质粒,转染L929细胞后,发现当报告基因EGFP的上游含有包括5‘UTR在内的TNFα基因启动子序列时,重组质粒在L929细胞中均能表达EGFP,但是,当EGFP基因3‘端同时含有TNFα基因的3‘UTR时,重组质粒转染L929细胞后,均不能表达EGFP,因此,在L929细胞中,TNFα基因的3‘UTR对基因表达具有抑制作用,进一步研究发现,在L929细胞中,TNFα基因的3‘UTR对基因表达的抑制作用需要其5‘UTR的共同参与,而且,RT-PCR实验表明,LPS在其他细胞中对TNFα基因起诱导作用的机制在L929细胞中不存在。 相似文献
5.
血小板生成素(throm bopoietin, TPO)是调节血小板生成最主要的细胞因子,其生物学效应由其受体c-Mpl介导.利用酵母双杂合系统(tw o-hybrid system )筛选与c-Mpl相互作用的蛋白质因子,以Gal4 BD融合c-Mpl膜内部分cDNA 的pASMM 为靶蛋白质粒,筛选了人胎盘cDNA 文库,分离到人波形纤维蛋白(vim entin)的部分编码序列,首次检测到波形纤维蛋白与TPO 受体之间的相互作用,这提示细胞骨架蛋白可能在TPO 的信号转导过程中起着重要的作用 相似文献
6.
GFP标记的GDNF重组腺病毒载体的构建和体内外表达 总被引:2,自引:0,他引:2
通过构建绿色荧光蛋白(GFP)和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)共表达的腺病毒载体,讨论其在治疗脊髓和脑有关神经系统疾病的潜在应用价值,了解腺病毒载体在大鼠体内的分布及在体外分泌外源基因产物能力,并对其生物安全性作了初步考察,为GDNF重组腺病毒载体在临床和基础研究中的应用作了一定准备. 相似文献
7.
将人肿瘤坏死因子受体Ⅰ(hTNFRI)死亡域基因克隆在氯霉素乙酰转移酶(CAT)的后面,构建成重组表达质粒pLT10 CATLDd.该融合蛋白基因转化大肠杆菌后发酵,IPTG诱导2 h,SDS-PAGE测定CATLDd 蛋白质的分子质量为39 ku.Western 印迹实验进一步作了鉴定.表达产物为包涵体.CATLDd 蛋白质经Q-Sepharose 柱层析后纯度大于95% . 相似文献
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9.
人和小鼠神经干细胞的体外培养的分化研究 总被引:4,自引:0,他引:4
首次克隆了小鼠神经元标志性微管蛋白βⅢ基因,从核苷酸序列推导出小鼠与人两者之间在其羧基端有相同的EAQGPK六肽,进一步证实用抗人微管蛋白βⅢ单抗可检测小鼠神经干细胞分化成的神经元细胞,免疫组化鉴定显示小鼠神经干细胞在体积分数为1%胎牛血清(FBS)诱导下,可分化成神经元,星形胶质细胞,少突胶质细胞,同时培养了13周龄胎儿脑来源的人类神经干细胞,用特异性的抗人nestin抗体鉴定,全部为阳性细胞,但它们经诱导分化产生较不同寻常的细胞分化细胞和分化程度,在生长因子减半和1%FBS诱导条件下可分化为神经元和星形胶质细胞,而无少突胶质细胞分化,NF单抗检测证实为早期分化的神经元。 相似文献
10.
~(125)I-BSA and human ~(125)I-DNA fragments have been prepared for tests of loading efficiencyby the erythrocyte ghosts, which is found to be 3.7 and 3.0 per cent respectively. The experi-ments are reproduceable. The ~(125)I-DNA fragments trapped in the erythrocyte ghosts aretransferred into DON cells through cell fusion or "microrinjection". The injection efficiencyappraised by autoradiography amounts to 58 per cent. 相似文献