一种PCR快速鉴定重组体DNA阳性克隆及插入方向的方法

当外源DNA以非定向的方式插入克隆载体时,需用测序或酶切的方法确定插入方向,上述两种方法或昂贵或费力。描述了一种快速、简便的PCR法,即利用载体的通用引物和目的片段的两个特异性引物直接扩增重组菌落,从而达到鉴别DNA插入方向的目的。     

靶标替换消减SELEX技术筛选小鼠IgG Fc片段的DNA配基及其活性鉴定

建立高特异性和亲和力的小鼠IgG Fc片段DNA配基筛选方法.采用几种小鼠IgG亚类(鼠抗HBV-IgG、小鼠IgG的Fc,IgG1,IgG2a)作为靶分子,利用靶标替换消减SELEX筛选方法进行16轮筛选.利用dot-blot,高压液相色谱以及凝胶阻滞(EMSA)方法对所得配基进行活性鉴定.经过16轮筛选,得到了与小...     

前列腺癌细胞乳鼠移植瘤动物模型的建立

为构建前列腺癌细胞(PC3)乳鼠移植瘤动物模型,在体外培养PC3细胞,经软琼脂克隆形成实验筛选PC3细胞株中具有克隆形成能力的细胞,常规传代后取对数生长期细胞,接种约2×107 mL-1单细胞悬液0.1mL于出生2d的乳鼠颈部和前肢交界处皮下,建立移植肿瘤动物模型,观察乳鼠肿瘤生长特点,并用病理组织HE染色和免疫组织化学染色鉴定PC3在乳鼠皮下的成瘤情况.结果显示注射后乳鼠未见明显的不良反应.1~6d可见乳鼠皮下肿胀,且能触及到黄豆粒大小的肿物;7~15d肿物变大,肉眼能观察到明显肿物;16~21d时肿物有消退迹象.病理组织HE染色观察显示肿块为肿瘤组织,免疫组织化学染色显示肿物中CD133呈强阳性表达.     

用阴离子交换色谱法制备寡聚核苷酸

建立了用Source 15Q强阴离子交换柱分离纯化寡聚核苷酸的方法.在pH 9.0,以20 mmol/LTris-HCl缓冲液 2.0mol/L NaCl为流动相,线性浓度梯度洗脱,紫外检测波长为260 nm,流速为1 mL/min的分离条件下,能很好地分离18～78 mer的合成寡聚脱氧核苷酸和PCR的单双链产物,探讨了流速和盐浓度对分离的影响,并测得24mer OligoDNA的回收率为90%左右.该方法简便、快捷、分辨率高,可用于寡聚核苷酸、反义核酸药物的分离、纯化、鉴定和制备.     

环氧基化磁性微球的制备及表征

采用反相聚合包埋技术制备以Fe3O4为磁核,琼脂糖为壳层的琼脂糖磁性微球,用环氧氯丙烷对其进行表面化学修饰后制得环氧基化磁性微球.通过傅里叶变换红外光谱、热重分析和振动样品磁力测定等表征其结构和性质,采用酶联免疫吸附试验检测其对乙肝表面抗原的固定能力.结果表明,环氧基化磁性微球平均粒径为30.3μm,环氧基含量为140.19μmol·g-1,磁含量为50.53%,饱和磁化强度为11.25emu·g-1,对乙肝表面抗原的固定能力明显高于琼脂糖磁性微球,具有良好的单分散性、超顺磁性和生物兼容性,可作为筛选乙肝表面抗原特异性核酸适配体的载体.     

辣根过氧化物酶催化水溶性聚对苯二胺-对氨基苯磺酸的合成及表征

以辣根过氧化物酶(HRP)为催化剂,H2O2为氧化剂,催化对苯二胺与对氨基苯磺酸共聚,合成了聚对苯二胺-对氨基苯磺酸(PAn-I)。利用紫外光谱、红外光谱、XPS、GPC、循环伏安、热重分析等方法对合成的PAn-I进行了结构表征与分析,测定了其电导率、电活性和热稳定性等。结果显示,合成的PAn-I不仅具有一定的电活性和热稳定性,且在水溶液中具有良好的溶解性。合成过程中采用去离子水作为反应介质,避免了使用有机溶剂,反应条件温和,酶的用量也较少。