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重组羧肽酶B在胰岛素原C肽制备工艺中的应用 总被引:2,自引:0,他引:2
用RT-PCR方法克隆了大鼠羧肽酶原B的cDNA编码序列,将其重组到原核表达质粒pT7-473中,并在大肠杆菌中以包涵体方式获得高表达。SDS-PAGE电泳及灰度扫描显示表达量达菌体总蛋白的35%,表达产物融合了表达质粒上的6His。在变性条件下,经Ni-NTA柱纯化,得到羧肽酶原B,在复性液中进行稀释复性后,胰蛋白酶切得具酶活性的羧肽酶B,然后经DEAE-FF分离纯化获得较纯的羧肽酶B(28.5mg/L),比活为13.5u/mg。用RP-HPLC分析胰蛋白酶 羧肽酶B酶解胰岛素原C肽三聚体的酶解产物,证明该重组的羧肽酶B可替代提取的羧肽酶B应用于胰岛素原C肽的制备工艺中。 相似文献
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钝顶螺旋藻Fe-SOD的纯化及性质 总被引:2,自引:0,他引:2
以螺旋藻中分离纯化的Fe-SOD平均比活为4576U/mg,总活力回收率50%,纯度达电泳纯,SDS-PAGE测定纯化的Fe-SOD亚基相对分子质量为21ku,每分子亚基含0.7个Fe原子;在Tris-盐到缓冲液中的最适pH为8.2,最适温度为25℃,在紫外区279nm有最大光吸收,酶的pH稳定范围为6~11,65℃以上迅速的失活,该酶对H2O2敏感,在5mmol/L H2O2中迅速失活,而在Ψ=0.1的乙腈和5mmol/L叠氮化钠中稳定。 相似文献
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