转座子诱变甘蓝黑腐病菌所获胞外多糖突变体的类型

根据对转座子Ｔｎ５ｇｕｓＡ５诱变甘蓝黑腐病菌所获得３９株胞外多糖突变体的３种胞外酶活性和在含２％葡萄糖的ＮＹＧＡ培养基上的菌落形态的检测结果，将突变株分成５种类型。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果表明它们的突变位于基因组中的８个不同的位置，其中１个位于已鉴定的ｒｐｆ调控基因簇     

转座子诱变甘蓝黑腐病菌所获胞外多糖突变体的类型

据对转转子Ｔｎ５ｇｕｓＡ５诱变甘蓝黑腐病民获得３９株胞外多糖突变休的３种胞外酶活性和在含２％葡萄ＮＹＧＡ培养基上的菌落形态的检测结果，将突变株分成５种类型。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果表明它们的突变位于基因组中的８个不同的位置，其中１个位于已鉴定的ｒｐｆ调控基因簇。     

堆肥未培养细菌的宏基因组文库构建及新的木聚糖酶基因的克隆和鉴定

从自制堆肥样品中提取未培养细菌的总DNA,用柯斯质粒pW EB∷TNC为载体构建宏基因组文库,对文库进行筛选获得表达木聚糖酶活性的克隆,再进行亚克隆、测序分析以及B lastx搜索G enB ank分析木聚糖酶基因。结果构建得到一个包含约5万个克隆的宏基因组文库,文库中外源DNA总容量约为1.8×106kb,获得2个表达木聚糖酶活性的克隆:pGXN 1050和pGXN 1051,鉴定分析表明:pGXN 1050上潜在的木聚糖酶基因um xyn 11A具1个771bp的ORF(Open R ead ing F ram e),可编码含257个氨基酸的蛋白质,所编码产物与混合纤维弧菌(C ellv ibr io m ix tus)的内切-1,4-β-木聚糖酶(G enB ank索引号Z48925.1)的氨基酸序列有46%的一致性和57%的相似性;pGXN 1051上潜在的木聚糖酶基因um xyn 11B具一个723bp的ORF,可编码含241个氨基酸的蛋白质,编码产物与混合纤维弧菌的内切-1,4-β-木聚糖酶(G enB ank索引号Z48925.1)的氨基酸序列有73%的一致性和80%的相似性。木聚糖酶Um xyn11A和Um xyn11B都属于糖基水解酶家族11的成员。     

水稻白叶枯病菌1个毒性相关基因的鉴定

我们曾报道了来自水稻白叶枯病菌真基文库的重级质粒ｐＧＸＮ３０００中含有一个能互补甘蓝黑腐病菌ｒｐｆＧ致病因子调控基因突变全的基因，并通过转座子诱变获得子转座子插在ｐＧＸＮ３０００中的这一基因的转座子插重组质粒，本研究利用这些转座子插入重组质粒，通过标记置换方法构建了不稻白叶枯病菌这一基因的突变菌株，植株试验结果表明，突变株虽然在水稻中仍能正常生长繁殖，但毒性严重降低，说明水稻白叶枯病菌的这一基因在     

萝卜叶片总RNA提取方法比较

获得高质量的RNA是进行RNA相关分子生物学实验和研究的前提.尽管目前已建立了多种真核生物总RNA的提取方法,但这些方法是否适用于提取萝卜(Raphanus sativus L.Var.radiculus Pers.)的总RNA还不清楚.本研究分别采用Trizol法、改进的异硫氰酸胍法和改进的SDS--酸酚法提取萝卜叶片总RNA,并通过分析所得RNA的电泳图谱、得率和纯度来判断这三种方法的优劣, 确定了提取满身红萝卜总RNA的最适方法.实验结果表明,Trizol法和改进SDS酸酚法提取的总RNA中蛋白质和DNA污染比较严重,不能用于下一步实验;而改进的异硫氰酸胍法提取的总RNA得率高、纯度高、完整性好、少降解,完全适合用于Northern blotting,小RNA分离、cDNA文库的构建等分子生物学实验.     

野油菜黄单胞菌色素的分离与稳定性研究

液体发酵野油菜黄单胞菌,生产大量菌液,通过离心、浓缩获得野油菜黄单胞菌色素干品,进行热、光照、酸碱度对色素稳定性的影响试验。结果表明,野油菜黄单胞菌黄色素在高温、长时间光照、强酸碱度条件下,性状稳定,吸收波长稳定在330 nm。     

十字花科黑腐病菌一个致病相关基因的鉴定

十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,简称Xcc)8004菌株的一个转座子插入突变体186807,其Tn5gusA5插入位点位于一个推测的双组分调控系统的感受蛋白基因XC2229中.该突变体对寄主植物满身红萝卜的致病力显著降低.为了进一步证实XC2229基因与该菌致病力之间的相关性,本工作构建了该基因的缺失突变体DM2229.DM2229与186B07在寄主上的致病力基本一致,均显著低于野生型Xcc 8004.生化及表型检测结果表明,DM2229的胞外多糖(exopolysaccharides,EPS)产量降低,细胞运动能力减弱.用带有完整XC2229基因的pLALR6互补DM2229,互补菌株CDM2229在EPS合成、细胞运动能力以及致病力方面与野生型Xcc 8004基本一致.这些实验结果表明,XC2229是一个与EPS合成、细菌运动相关的基因.推测该基因通过调控EPS的生成和运动能力而影响Xcc的致病力.     

茄假单胞菌寄主花生特异性毒性基因的定位

通过对从茄假单胞菌中克隆的pGX1252进行亚克隆分析,发现含pGX1252右边4.5kbKpnI/EcoRI片段的亚克隆pGX1404仍象pGX1252一样能使对花生不致病菌株T2014在花生上致病.用转座子Tn5-loc对pGX1404进行了饱和插入诱变,一共分离得到6个在pGX1404上不同位置的独立插入突变,其中离pGX1404右末端约1.4kb、2.2kg的两个Tn5-loc插入使pGX1404丧失了扩大T2014寄主范围的能力,证实hsv基因位于pGX1404的右边.     

慢生型大豆根瘤菌染色体的16kb EcoRⅠ DNA片段的亚克隆测序分析

亚克隆测序分析发现，在Bradyrhizobium japonicum的GX201菌株染色体的16kb EcoR I DNA区段上含有一个与putA基因同源的基因的ORF 3054（Open Reading Frame)，该基因ORF长3054bp，在核苷酸水平上与已报道的putA基因有94％一致性，其推断性的编码产物在氨基酸水平上与putA编码产物脯氨酸脱氢酶（ProDH)有95％一致性，利用Tn5gusA5诱变的方法获得了该同源基因的标记置换突变体，该突变体在液体培养基（YMA）中的生长速率比野生菌株慢。