应用免疫胶体金技术对核骨架-Lamina-中间纤维体系标记定性

用选择性系列抽提技术与整装制样方法相结合,清晰地显示了Hela细胞与BHK_(-21)细胞的核骨架—Lamina—中间纤维结构体系。在此基础上,用电镜免疫胶体金标记技术对这一精细结构体系的成份分别进行定性研究,实验结果说明:Hela细胞与BHK_(-21)细胞核骨架纤维均能被298KD的核骨架蛋白单抗—金颗粒标记,它们的Lamina均被LaminA单抗—金颗粒标记,Hela细胞的中间纤维既能被角蛋白单抗又能被波形蛋白单抗—金颗粒所标记,而BHk_(-21)细胞的中间纤维却只能被波形蛋白单抗—金颗粒标记,不能被角蛋白单抗—金颗粒标记,但BHK_(-21)细胞的Lamina却与角蛋白单抗有交叉反应。将核骨架—Lamina—中间纤维体系的精细结构与其蛋白成份的定性同时准确地显示出来,至今尚未见过报导。     

BHK21细胞的中间纤维体系

应用选择性系列抽提方法与整装细胞制备技术、DGD包埋—去包埋剂切片技术相结合,清晰的显示了BHK_(21)细胞中间纤维,其单丝直径为10nm。近核区的中间纤维呈致密交织的网络,胞质远侧区的中间纤维有规则的平行排列。免疫荧光与免疫胶体金标记实验说明,经上述选择性系列抽提后存留的胞质结构仅对波形蛋白(Vimentin)抗体呈阳性反应。最后用双向电泳技术分析了BHK_(21)细胞中间纤维波形蛋白的分子量为55KD。