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采用mRNA差异显示技术(DDRT—PCR)比较了悬浮培养的中国红豆杉细胞合成紫杉醇前后的基因表达差异,并从紫杉醇合成期细胞中分离出一个特异表达的cDNA克隆TS1.TS1长度为638bp,序列相似性分析结果表明它代表一新基因序列(Genbank登录号:AF426429),将此新基因命名为TS1-FL.开放读框分析结果表明Tsl拥有一个不完整的开放读框,蛋白质同源性检索没有发现与TS1翻译序列有较大同源性的蛋白质.对此基因的进一步研究可揭示它在紫杉醇生物合成中所扮演的角色. 相似文献
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p16蛋白对B型流感病毒诱导HeLa细胞凋亡的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
以流感病毒 B/沪防 93- 1株感染 He L a细胞 ,通过 Hoechst332 5 8荧光染色、琼脂糖凝胶电泳分析检测细胞凋亡 ,并用免疫组化技术测定 p16蛋白的表达 ,探讨 p16蛋白表达对 He L a细胞凋亡的影响 .结果表明 ,B型流感病毒感染 He L a细胞可诱导其凋亡 ,感染 2 4h后 ,细胞凋亡数达 84.5 % ;He L a细胞凋亡伴随 p16蛋白的表达 ,2 4h达高峰 ,阳性率为 49.2 3± 1.70 .研究结果提示 ,B型流感病毒感染诱导 He L a细胞凋亡过程与 p16基因激活相关 ,p16蛋白可能是介导流感病毒诱导细胞凋亡的另一重要途径 . 相似文献
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用荧光染色技术及流式细胞仪分析方法研究了 A1/京防861 和 B/沪防931 两株流感病毒感染与细胞凋亡的关系,探讨利用嗜麦芽假单胞菌黑色素抑制流感病毒诱导 M D C K 细胞凋亡的可能性 结果显示:黑色素在 100 m g· L- 1 浓度范围内,对 M D C K 细胞无细胞毒性; A1/京防 861 和 B/沪防 931 两株流感病毒均可诱导 M D C K细胞凋亡,但二者存在毒力差异(p< 0.05)病毒感染12 h 后,荧光染色可观察到典型的凋亡核形态,流式细胞仪则可检测到病毒诱导 M D C K 细胞产生的凋亡峰,且细胞凋亡率分别为37.02% 和 2729% ;20 m g· L- 1 的黑色素可有效抑制两株流感病毒诱导细胞凋亡,使细胞凋亡指数从25% ~35% 降至3% 以下 结果表明,黑色素可以抑制 A 和 B型流感病毒诱导细胞凋亡 相似文献
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中国人CD59cDNA克隆、序列分析及其表达 总被引:1,自引:0,他引:1
用RT-PCR方法从中国人胚胎总mRNA中扩增出420bp人补体终末阶段同源限制因子(CD59)的cDNA,序列分析结果表明,所获得的CD59cDNA与文献报道中的基因序列完全一致,含CD59全长编码区.构建了真核表达质粒,在3T3细胞中得到了表达. 相似文献
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本论文采用LKB-2277生物活性检测器研究HeLa细胞在单纯疱疹Ⅱ型病毒感染和BHK-21细胞在口蹄疫病毒感染下的能量代谢过程,以及热疗及抗病毒药物干扰素对这一过程的能量代谢的影响。结果表明病毒感染细胞的代谢热功率大于未被感染的细胞并且被不同类型病毒感染的细胞之间代谢产热功率存在显著的差别;病毒感染是一个温度敏感的过程;干扰素对病毒感染过程有抑制作用。通过对不同贮存时间口蹄疫病毒感染BHK-21细胞的能量代谢产热曲线的分析表明长时间保存对病毒的毒力和感染能力产生了较明显的影响。这些结果都表明微量热法是研究病毒感染过程的一种有效方法。 相似文献
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报道了利用正交试验设计的原理和方法,筛选冷冻干燥保藏盐生盐杆菌(Halobacteriumhalobium)菌株R1的保护剂组成与最佳配比的结果.直接分析和方差分析的结果表明:在由NaCl、水解乳蛋白、海藻糖和蔗糖4种成份组成的保护剂系统中,海藻糖对菌株R1冷冻干燥存活率影响最大,为主要因素;其次为蔗糖和NaCl;水解乳蛋白影响最小,为次要因素.保护剂最优的水平组合为NaCl16%、水解乳蛋白4%、海藻糖6%、蔗糖18%.采用正交法从传统“简单可比性”需81次的实验减少到9次,并且正交法的综合可比性能在较短时间内找出最佳的水平组合.利用最佳组合的保护剂使冷冻干燥菌株R1存活率达到91.80%.从试验的结果可以认为只要选择适当的保护剂,用冷冻干燥法保藏嗜盐菌是安全可行的. 相似文献
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在扩增、克隆PRVtk、gH基因的基础上,构建了包含tk和gH基因片段的转移载体质粒pTK2.5.以PRV糖蛋白gG启动子(PgG)为控制外源基因表达的启动子,以E.colilacZ为报道基因,用其替换pTK2.5质粒tk区的Sall与Xhol之间的序列,构建了转移载体质粒pTK.LacZ.瞬时表达证实,转染细胞的pTK—lacZ质粒在野生型PRV感染的情况下,能有效表达β-Gal酶活性.将pTK.1acZ转染BHK21细胞后再以PRV感染进行同源重组,在143TK-细胞上经5.溴脱氧尿苷选择,Vero细胞纯化,X-GaI染色,蓝斑筛选,分离到重组体PRV(rPRV).rPRV与野生型PRV在细胞上具有类似的生长特性,且经过连续传代的rPRV仍能稳定的表达β-Gal酶活性. 相似文献
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采用优化组合保护剂冷冻干燥20株极端嗜盐菌,于4℃冷库保存2年,经复水测定,全部菌株保持较高存活性.用TENS法对其中9株菌R1,RF1,J7,S9,T4~1,J6,R6~1,R6~7和R6~5作质粒稳定性检测,含质粒的菌株RF1,J7,S9,T4~1,R6~5于4℃保存2年后,质粒稳定存在;而菌株R1,J8,R6~1和R6~7冻干保存前后均末检测到质粒.结果表明:优化组合保护剂不仅能有效地用于极端嗜盐菌的冷冻干燥保藏,还能保持宿主质粒的稳定性. 相似文献
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采用荧光探针染色法,琼脂糖凝胶电泳分析方法.流式细胞仪技术研究丝裂霉素诱导CHO-K1细胞凋亡及对其细胞周期的影响.结果显示,丝裂霉素处理CHO-K1细胞后,细胞核质收缩凝集,核碎裂及出现凋亡小体;琼脂糖电泳呈现典型的DNA梯带;流式细胞仪检测到典型的细胞凋亡峰(亚G1峰),分别用10,15,20,25mg/L丝裂霉素处理CHO-K1细胞,其细胞凋亡率分别为4.76%,9.20%,14.51%,37.46%,且凋亡率随药物浓度的升高而升高,显示两者的正相关性;作用浓度相同而改变处理时间时.发现细胞凋亡率随处理时间的延长而呈上升趋势;流式细胞仪细胞周期分析,显示随着丝裂霉素浓度提高或作用时间延长,G1-S期细胞百分比降低,G2/M期细胞百分比升高,Ap峰与G1-S期负相关,与G2/M期正相关. 相似文献