增强型绿色荧光蛋白的色谱分离和纯化

增强型绿色荧光蛋白(EGFP)是生物领域常用的标记物。在前期成功克隆表达EGFP的基础上,本实验建立了两步分离纯化EGFP的色谱方法,并验证其分离纯化效果,检验EGFP的活性。首先用金属螯合亲和色谱柱HisTrap HP对EGFP的重组菌体破碎上清液进行初步分离,再用葡聚糖凝胶排阻色谱柱Sephadex G-10 HR对其进行脱盐纯化。采用丙烯葡聚糖凝胶排阻色谱柱Sephacryl S-300 HR和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测分离纯化后的EGFP纯度。最后通过荧光分光检测器和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)验证分离纯化后的EGFP是否具有荧光活性。结果表明该方法可以简便快速地分离纯化EGFP,纯度超过98%,同时保持了EGFP的荧光活性。     

紫外-可见微板分光光度法测定苯基环氧乙烷

苯基环氧乙烷在制药、农药、铁电液晶、香料、精细化学品等工业上有着重要的应用价值[1],尤其是在手性药物和生物活性物质的合成过程中作为重要的手性结构单元被广泛应用[2]。苯基环氧乙烷的检测方法有高效液相色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法[3]。但由于上述方法检测成本较高,且耗时较长,不适用于生物和化学合成过程的大批量筛选。为建立快速、简便的检测方法,本文利用苯基环氧乙烷与4 对硝基苄基吡啶的显色反应,用紫外 可见微板光谱法测定苯基环氧乙烷。微板光谱法同常规方法相比具有样品和试剂用量少,成本低,灵敏度高,一次检测样品…     

双波长微板法测定细胞悬浮液中的环氧化物

用双波长微板法研究了缓冲溶液与细胞悬浮液中吸光度与环氧化物浓度的关系,通过分析比较发现,在两种体系中的回归曲线相互平行。据此,可用缓冲体系中所测结果绘制标准曲线,计算细胞悬浮液中环氧化物的含量。在建立了双波长微板法测定混浊体系中环氧化物的基础上,环氧化物水解酶活力可以方便快速的检测。     

光学纯（4S，5R）－4－甲基－5－羟基－3－羰基己酸特丁酯的化学酶促合成

采用化学方法合成了4－甲基－3，5－二羰基己酸特丁酯。以Lactobacillus brevis醇脱氢醇为生物催化剂，选择性地将4－甲基－3，5－二羰基己酸特丁酯还 原为（4S，5R）－4－甲基－5－羟基－3－羰基己酸特丁酯（99．2％ ce,sym: anti=97:3)。     

阿立哌唑的合成

以2,3-二氯苯胺为原料,经3步亲核取代反应合成了阿立哌唑。3步反应的收率分别为83%,91%和90%;总收率68%。阿立哌唑的结构经1H NMR,IR和元素分析表征。     

高效液相色谱仪泵压过高的故障分析

泵压过高是高效液相色谱仪最常见的故障之一，介绍了导致泵压过高的各种成因的分析方法，利用分段拆卸法可以 简便，快速，准确地判断仪器的故障部位。