影响哺乳动物体细胞克隆效率因素的研究进展

动物克隆技术的低效率在很大程度上限制了它的应用.克隆过程的多步骤决定了影响因素的多样性.综述了体细胞核的重编程、供体细胞的选择、受体胞质、活化方法、培养条件等对克隆效率的影响,对这些问题的认识将有利于对克隆机理的研究.     

哺乳动物异种克隆的研究进展

哺乳动物异种克隆是通过异种核移植和异种妊娠两个种克隆的原理,存在的问题和可能的解决办法进行了阐述,并对近年来本实验室以及国际上该领域中的研究进展作了介绍.     

成纤维细胞和ES细胞在小鼠和兔去核卵母细胞内发育

以昆明白小鼠成纤维细胞和胚胎干（ES）细胞作为供核细胞,以昆明白小鼠和日本大耳白兔的MⅡ期去核卵母细胞作为受体,采用核移植方法,构楚了克隆胚胎．在同种克隆中,以ES细胞为供核细胞的克隆胚胎卵裂率明显低于以成纤维细胞为供核细胞的克隆胚胎卵裂率（24．4％相对于56．9％,P〈0．05）,1．8％的ES细胞克隆胚胎发育到囊胚阶段,而成纤维细胞克隆胚胎没能发育到囊胚阶段;在异种克隆中,以ES细胞为供核细胞的克隆胚胎卵裂率（89．6％）和囊胚发育率（18．8％）明显高于以成纤维细胞为供核细胞的克隆胚胎卵裂率（54．2％）和囊胚发育率（4．2％）．     

微管和微丝在小鼠受精卵原核迁移中的作用

本文用微管、微丝解聚剂处理小鼠体内受精卵,发现雌雄原核的迁移均被抑制,说明雌雄原核的迁移是微管和微丝共同作用的结果。     

蛋白激酶C在卵母细胞减数分裂成熟和受精中的作用

蛋白激酶C(PKC)是一类广泛分布在真核细胞中的单链丝/苏氨酸蛋白激酶超家族,在卵母细胞成熟和受精的多个环节发挥着重要调节作用.在卵母细胞成熟过程中,PKC的作用决定于它存在的位置:卵丘细胞中PKC的激活能够促进卵母细胞恢复减数分裂,而卵母细胞中PKC的激活却抑制自身的生发泡破裂.PKC活性在卵母细胞成熟过程中逐渐升高,在第一次减数分裂中/后期转换时活性下降,使卵母细胞得以排出第一极体,进入第二次减数分裂.在哺乳动物卵子的受精过程中,PKC可能作为钙离子的下游靶分子,引发皮质颗粒的排放,并使卵子突破MII期阻滞,形成原核.PKC还参与调节其他重要蛋白激酶,如成熟促进因子(MPF)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的活性.目前已经在哺乳动物卵子中发现多种PKC亚型,其中经典型PKC可能在卵皮质反应中发挥最主要的作用.结合作者的工作,对目前已知的PKC在减数分裂与受精中的作用进行了评价和展望.     

哺乳动物有性与无性生殖的实验胚胎学研究

近50年来，发育生物学和生殖生物学领域出现了两大突出进展，震撼了生物学界和整个世界。一是哺乳动物精子获能的发现而创建了试管动物和试管婴儿技术，它标志着人们对生殖生理和生殖控制的完善；二是以卵子为受体的克隆动物的诞生，使哺乳动物体细胞克隆成为可能，这标志着人类对生殖和发育机制的发挥和创新，并为人类干预生殖和发育开拓了广阔前景。虽然受精生物学与动物克隆是研究生命启动奥秘的一门学科，已成为生命科学研究的核心之一，但是还有诸多问题亟待发掘并需要深入研究。本文主要从以下两方面介绍20年来在该领域研究中取得的进展与成果：（1） 动物有性生殖研究方面侧重介绍受精机理和显微受精的研究成果；（2） 动物无性生殖研究方面重点介绍克隆牛及其基础研究的进展。     

克隆与大熊猫

体细胞克隆羊多莉的诞生是生命科学领域具有划时代意义的重大突破。现在克隆带来了一些伦理的争论,引发了一些远未解决的问题,因此加强对克隆的研究显得更为重要,更具有重要的意义。体细胞克隆的成功,揭示了体细胞可以在去核(去染色体)的卵胞质中能重新程序化,高度分化的体细胞核内基因组可以逆转。从此宣布人类已经进入高等动物体细胞可以进行无性繁殖(克隆)的新时代。那么何谓克隆?克隆是英文clone的译音,是指由一个细胞祖先经过分裂、增殖而形成的纯细胞系,这个细胞系中的每一个细胞的遗传特性都相同,亦称为     

STUDY ON in vitro SPERM CAPACITATION AND EGG-PENETRATION OF GIANT PANDA

A preliminary report on in vitro sperm capacitation and egg-penetration of giant panda is briefly presented. The panda spermatozoon consists of head, neck and tail, just like the spermatozoa of other animals. Before capacitation sperm heads clusterd together and dispersed after capacitation. They were then able to swim straight forwared. During the time of in vitro capacitation the plasm membrane of the sperm head was first expanded tov arious degrees, then disintegrated, and finally became detached. The electro-dense material in the acrosome appeared in small clumps with high density. Extensive vesiculation occurred between the bi-layered acrosome membranes and thus led to disintegration. Vesiculation in panda sperm differs from that reported in hamsters. When the capacitated panda spermatozoa came into contact with the hamster eggs, the region between the acrosome collar and postacrosome cap first fused with the egg membrane followed by the penetration of the nucleus into the cortex of the egg. Some o     

卵母细胞减数分裂和受精过程中MPF和MAPK的作用和相互调节

在卵母细胞减数分裂成熟和受精过程中,MAPK级联信号途径和MPF起着关键性的作用.这两种蛋白激酶信号途径以及它们之间协调的相互作用影响着整个动物界卵母细胞减数分裂成熟和受精过程,包括促进生发泡破裂、抑制减数分裂过程中的DNA复制、调节染色体的分离、维持MII期阻滞、诱发第二次减数分裂恢复等.文中对卵母细胞减数分裂和受精过程中MPF和MAPK的作用和相互调节进行了综述.     

克隆牛过程中电融合条件对附植前胚胎发育的影响

实验比较了克隆牛过程中电融合条件的改善对附植前胚胎发育的影响. 电融合强度为140 V/mm,10 μs/次时的效率要较100 V/mm,20 μs/次和180 V/mm,10 μs/次时高,可以降低融合后重构胚死亡率,提高克隆牛囊胚发育率. 施加直流电脉冲前先给予5 V交流电场预处理数秒钟,然后在电极之间通以两个直流脉冲(140 V/mm, 10 μs/次,间隔0.1 s)与不用交流电预处理对融合率和重构胚的发育率无显著差异. 另外实验比较了甘露醇和山梨醇两种融合液对融合及重构胚发育的影响,结果表明囊胚发育率差异不显著,但山梨醇较甘露醇融合液更容易操作. 实验生出的4头克隆牛存活至今.