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异亮氨酸拉链结构对可溶性CD40L生物学活性的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
CD40配基(CD40L)为TNF超家族中的一员,瞬时表达于激活的CD4^ 的T淋巴细胞上.自然状态下膜上三聚体的CD40L通过和CD40受体(CD40R)结合,在免疫监视和肿瘤免疫中发挥作用.以PCR方法从peDNA3-CD40L质粒上扩增得到编码CD40L基因的胞外部分sCD40L,并将该片段插入大肠杆菌表达质粒pET30a上,构建得到大肠杆菌表达质粒pET30a-sCD40L;同时,在sCD40L的N端融合了异亮氨酸拉链(Isoleucine Zipper,IZ)结构,构建得到表达质粒pET30a-IZ-sCD40L.表达质粒在大肠杆菌中表达,得到可溶性的重组人CD40L和IZ-CD40L.SDS-PAGE分析结果表明重组人rhsCD40L和IZ-rhsCD40L在相应分子质量位置都有明显的条带产生,并得到Western blotting的确认.非SDS-PAGE电泳结果显示,异亮氨酸拉链结构有利于rhsCD40L蛋白形成聚合体结构.B细胞增殖实验和人骨髓瘤细胞株XG2凋亡实验结果都表明,异亮氨酸拉链结构提高了rhsCD40L的生物学活性. 相似文献
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为了对大肠杆菌中由aroG基因编码的3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合成酶(DAHP合成酶)进行结构与功能的深入研究,尝试了aroG基因在枯草杆菌中的表达。表达载体以pUB110为骨架,采用了枯草杆菌热激蛋白groESL基因的启动子,碱性蛋白酶subtilisin基因的信号肽和N-乙酰胞壁酸-L-丙氨酸酰胺酶cwlHB基因的转录终止子,将aroG基因在枯草杆菌WB600宿主菌中进行了分泌表达 相似文献
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