小鼠同种异体骨髓移植GVHD模型的建立

目的选择C57BL/6(H-2b)→BALB/c(H-2d)、C57BL/6(H-2b)→CB6F1(H-2d/b)分别作为完全异基因移植和半相合基因移植的供、受者;建立小鼠移植物抗宿主病(GVHD)模型。结果此GVHD模型动物于移植后1周体重进行性下降,前3天平均每天下降2g左右,此后体重下降趋势有所减缓。第8~12d体重略有回升,第12d后体重再度开始下降。并伴有皱毛、弓背、脱毛、腹泻及肛门红肿,皮肤增厚等症象。移植后12d开始有小鼠死亡,至移植后3周小鼠全部死亡,死亡时平均体重下降10g左右。病理学检查结果显示,肝脏汇管区大量分叶核细胞和淋巴细胞浸润,肝血窦内也有淋巴细胞浸润;肝血窦和中央静脉扩张瘀血。肠粘膜下层有大量淋巴细胞及分叶核细胞浸润,肠粘膜上皮坏死脱落。皮肤真皮层毛细血管扩张,有淋巴细胞和分叶核细胞浸润,符合GVHD症象及病理诊断。结论本实验动物模型是可靠的,可用于GVHD防治的实验性研究。     

以多药耐药基因为靶标的siRNA对耐药肿瘤细胞药物敏感性和凋亡的影响

目的:研究应用以多药耐药相关蛋白(MRP)基因为靶标的siRNA( small interference RNA) 抑制相应蛋白表达后,耐药肿瘤细胞药物敏感性和凋亡率的改变.方法:通过脂质体将以MRP基因为靶标的siRNA(100 μmol/L)转入柔红霉素(DNR)0.8、1.6、3.2、6.4、12.8 μg/mL处理的肺癌耐药细胞株SW1573/R20;阿霉素(ADM)1.6、3.2、6.4、12.8、25.6 μg/mL处理的白血病耐药细胞株K562/ADM;顺铂(DDP)0.125、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 μmol/mL处理的鼻咽癌耐药细胞株CNE2/DDP;以单纯化疗处理组和未处理组为对照.于转染后24、48、72h,用MTT法检测各组细胞生长抑制率,算出各细胞IC50.转染siRNA联合IC50剂量化疗处理6 h后流式细胞仪检测各细胞凋亡率和死亡率,24 h后RT-PCR检测相应基因mRNA表达水平,48 h后检测MRP蛋白表达率.结果:以MRP为靶标的siRNA 明显抑制各肿瘤细胞靶基因蛋白和mRNA的表达,与未处理组相比均有统计学差异(P＜005);转染以MRP为靶标的siRNA后,耐药肿瘤细胞对化疗药物敏感性明显增强,IC50明显降低,细胞凋亡率明显增加,与单纯化疗组相比有统计学差异(P＜005).结论:以MRP基因为靶标的siRNA,通过降低靶基因mRNA和蛋白表达,明显增加耐药肿瘤细胞药物敏感性和凋亡率.