不同培养条件对基因工程疫苗菌抗原蛋白表达的影响

基因工程菌的表达条件研究在现代生物高技术产业化的发展中具有重要的意义。影响基因工程菌表达的因素主要有pH值、温度、诱导剂IPTG的浓度、诱导时间等。笔者分别就以上因素对基因工程菌抗原蛋白表达的影响进行了初步研究。在摇床培养条件下，外源基因表达蛋白的最适表达条件为终浓度O．8mmol/L的IPTG，32℃，诱导6h。     

创建微生物实验教学新体系培养学生的综合能力

通过深化微生物学实验教学改革,建立了以“实验类型、教学方法、辅助途径、考核方式”为代表的四个四新型实验教学体系,激发了学生学习微生物学实验的兴趣,培养了学生的独立思考、创新意识和实验动手能力,提高了学生的综合素质。     

手性2-甲氧羰基-4-氟苯基-1,5-苯并硫氮杂卓的不对称合成及抑真菌活性

以(R)/(S)-4-苄基-2-噁唑烷酮为手性助剂,采用不对称合成方法制备了18个具有光学活性的2-甲氧羰基-4-氟苯基-1,5-苯并硫氮杂卓类化合物9a~9i和14a~14i,经HPLC分析e.e.值较为理想;通过核磁共振谱、红外光谱和高分辨质谱表征了其结构,通过单晶X射线衍射法确定化合物9h的相对构型;用抑菌圈法测试了目标化合物对新生隐球菌的抑菌活性.研究结果表明,由S型手性助剂诱导不对称合成的杂卓对新生隐球菌的抑制作用普遍高于由R型手性助剂诱导合成的杂卓及外消旋体.测试了抑菌活性较好的化合物14a~14f的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC),发现其对新生隐球菌的MIC和MFC均低于抗真菌药物氟康唑.     

圆弧青霉突变株HB01碱性脂肪酶基因的克隆和表达

圆弧青霉(Peniciuium cyclopium)突变株可产生一种具有工业价值的碱性脂肪酶(alkaline lipase,PEL),通过RT-PCR基因克隆及序列测定,获得了PEL完整的基因序列,该基因全长855bp,编码1个由285个氨基酸残基组成的酶蛋白,根据氨基酸组成推导该脂肪酶蛋白的分子量约为30kD.     

4-氟苯基-2,3-二氢-1,5-苯并[b]硫氮杂类化合物的合成、结构和抑真菌活性

合成了26个4-氟苯基取代的1,5-苯并硫氮杂类化合物2a~2z,其结构经核磁共振波谱、红外光谱和高分辨质谱确证.采用抑菌圈法测试了其对白色念珠菌和新生隐球菌的抑菌活性,结果表明,4-(2,3-二氟苯基)/(2,5-二氟苯基)/(3,4-二氟苯基)-2,3-二氢-1,5-苯并[b]硫氮杂(2a~2f)对新生隐球菌有较强的抑制作用,但杂2a~2z对白色念珠菌均无活性.进一步考察了高活性杂2a~2f对新生隐球菌的最小抑菌浓度(MIC,MIC80)和最小杀菌浓度(MFC),发现其MIC和MFC远低于对照药氟康唑.在此基础上,对杂2a~2f进行了初步构效关系研究,并合成了4个系列21个杂衍生物3a~3f,4a~4f,5a~5f和6a~6c.通过考察其对新生隐球菌的抑菌效果,证明了杂2a~2f分子中的硫原子、碳氮双键结构单元以及2位的甲氧/乙氧羰基是该类化合物抑真菌的必需基团.     

利用原生质体融合技术选育高产菌株

以龟裂链霉菌(Sterpomyces rimosus)98#和76#为出发菌株,分别用溶菌酶制得2个亲本的原生质体,其中76#采用15 W紫外灯下30 cm照射25 min,100 %灭活,用PEG诱导进行了原生质体的融合.通过比较菌落外观、颜色挑选融合子328株,结合前期代谢情况进一步筛选高单位的融合菌株8株,经反复传代考察融合子的稳定性后得到1株新菌株102#,其发酵单位比亲本提高了13.0%.     

2-甲氧/乙氧羰基-4-氟苯基-1,5-苯并硫氮杂的合成、抑真菌活性及构效关系

以高活性的2-甲氧/乙氧羰基-4-(4-氟苯基)-1,5-苯并硫氮杂A和B为模型化合物,设计合成了11个含氟杂衍生物3a~3k,考察了它们对白色念珠菌和新生隐球菌的抑菌活性.研究结果表明,2-甲氧/乙氧羰基-4-(2-氟苯基)/(3-氟苯基)/(2,4-二氟苯基)-1,5-苯并硫氮杂3a,3b,3d~3f对新生隐球菌有很强的抑菌活性,3c的活性中等,而7位氯代杂3g~3k基本无活性;上述杂对白色念珠菌均无活性.在此基础上,进一步测试了高活性杂3a,3b,3d~3f对新生隐球菌的抑菌浓度梯度、最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC),发现其MIC和MFC均远低于对照药氟康唑.为了考察杂3a~3f的药效基团,又设计合成了4类杂衍生物4a~4f,5a~5f,6a~6f和7a~7c,通过对其抑菌活性的评价,发现分子中2-甲氧/乙氧羰基和亚胺官能团对杂3a~3f的抑真菌(新生隐球菌)活性起关键作用,硫原子被氧原子或氮原子代替后原杂的活性降低.     

不同培养条件对基因工程疫苗菌生长的影响

基因工程菌的生长条件研究在现代生物高技术产业化的发展中具有重要的意义．影响基因工程菌生长的因素主要有培养基组分、温度、pH值、溶氧量等．笔者分别就以上因素对基因工程疫苗菌株生长的影响进行了研究．结果表明该基因工程菌株的最适生长条件为37℃，进口LB液体培养基，pH8．0，200r／min。50mL锥形瓶装20mL培养基．