花生根瘤菌吸氢培养基的改进

花生根瘤菌吸氢培养基的改进许良树，吕荣富，张凤章，曾定，龙敏南（生物学系）１９７８年Ｍａｉｅｒ等￣［１］首次在实验室条件下从大豆根瘤菌诱导氢酶活性、其中一个重要的步骤就是将原来富碳的ＬＮＢ５培养基中的碳源浓度降低。当碳源浓度降低１０倍时其活性最高，并...     

固定化棕色固氮菌的固氮酶活性

比较了用海藻酸钠、琼脂、聚丙烯酰胺、K-卡拉胶和明胶包埋法及DEAE-纤维素吸附法固定化的固氮菌的乙炔还原活性,表明海藻酸钠包埋的菌体固氮酶的活性最高、持续时间也最长,琼脂包埋的次之.菌体悬液(10~(20)/ml)与海藻酸钠(4％)的配比以1:5为佳。其固定化菌体的乙炔还原活性的最适pH为7.5,最适温度为32℃,Km为20μM,活化能为10.29kcal/mol,Vmax为14.2μM.丙二酸,2,4-二硝基酚,叠氮化钠,磺基水杨酸,硫酸铵,硝酸钾,高浓度亚硝酸钠有抑制作用,而低浓度亚硝酸钠有刺激作用,CO_2对其乙炔还原和放氢有抑制作用,CO对其放氢无抑制作用.其乙炔还原的最适氧分压为10kPa.     

光合细菌Chromatium vinosum可溶性氢酶的EPR研究

光合细菌 Chromatium vinosum可溶性氢酶经 5次柱层析 ( DE-2 3,TSK-DEAE( ) ,Ultragel Ac A-4 4 ,TSK-DEAE( ) ,Superdex TM75 )分离后被纯化 365倍 ,得率为 32 % ,其催化放氢的活性为 8.4μmol H2 /( min· mg prot) .氧化态可溶性氢酶在 4 5 K下 ,产生了 Ni( )的典型 EPR信号 ( gx,y,z=2 .37,2 .1 6,2 .0 1 6和 gx,y,z=2 .30 ,2 .2 3,2 .0 1 6) ;在 1 0 K下 ,没有出现膜结合态氢酶中存在的 [3Fe-4 S]簇特征 EPR信号 .可溶性氢酶被 H2 还原后 ,Ni( )的特征 EPR信号消失 ,同时出现一个 [4 Fe-4 S]簇的特征 EPR信号 ( gx,y,z=1 .88,1 .90 ,2 .0 4 5 ) .研究结果表明 ,C.vinosum可溶性氢酶在结构和功能上不同于膜结合态氢酶 ,是一种新的催化放氢的 Ni Fe-氢酶     

花生根瘤菌某些菌株在自生条件下的吸氧活力

用气相色谱法和亚甲蓝去色反应检测29个花生根瘤菌菌株的吸氢性能,只有5个菌株能吸氢·吸氢活力最高为689n mol H_2/mg prot.h.选试的四种培养基中以吸氢培养基对根瘤菌株吸氢活力效果最好,在该培养基中菌株不表现固氮酶活力.在不固氮情况下,外源氢是诱导吸氢活力的必需条件.培养基中的碳源浓度对菌株吸氢活力有明显的影响,高浓度的碳源抑制吸氢.一氧化碳和乙炔对菌株L8 3吸氢的抑制程度比菌株35_1小得多.     

钼酸盐-柠檬酸盐络合物及有机酸对棕色固氮菌生长的影响

将经过0.9%NaCl溶液处理8h的棕色固氮菌(AzotobactervinelandiiOP)作为菌种分别接入Burk′s培养基和用不同有机酸替代柠檬酸三钠或用不同等摩尔的钼络合物替代钼酸钠的各种改良的Burk′s培养基中,分别测定菌体生长曲线和固氮活性.结果发现,与Burk′s培养基相比,以高柠檬酸、苹果酸、马来酸替代柠檬酸三钠或以K6[Mo2O5(cit)2]·5H2O、K4[Mo2O5(Hcit)2]·4H2O和Na2[MoO2(Hcit)]·3H2O替代柠檬酸三钠和钼酸钠的培养基能促进菌体的生长;以乙醇酸替代柠檬酸三钠的培养基则会抑制固氮菌的生长;各种培养条件下菌体细胞的C2H2还原活性表现了类似的规律.讨论了固氮酶活性中心FeMoco在装配过程中钼的可能运输方式和装配机理.     

台湾毛豆根瘤吸氢及固氮特性的研究

测定了台湾毛豆根瘤在整个发育期吸氢和乙炔还原活性，发现该根瘤属于放氢型；根瘤的吸氢活力与根瘤的发育及固氮活力的高低相关，在根瘤固氮功能的旺盛期，表现较低的吸氢活性．花生根瘤菌变株Ｘ０２－４能与台湾毛豆建立共生关系，并提高根瘤的吸氢能力．     

螺旋藻(Spirulina platensis)放氢的研究

螺旋藻含有可逆性氢酶,在合适的条件下能催化放氢．研究表明：当培养基的ｐＨ值为８．５～９．５,气相氧浓度为１％的条件时,能使螺旋藻放氢达到最大效率．外加葡萄糖、蔗糖有利于放氢,葡萄糖、蔗糖的最适浓度为０．１ｍｏｌ／Ｌ,而ａ－酮戊二酸、柠檬酸等对螺旋藻的放氢没有促进作用．     

花生根瘤菌诱变株感染大豆结瘤和固氮

花生根瘤菌诱变株感染大豆结瘤和固氮龙敏南，许良树，张凤章，曾定（生物学系）根瘤菌在共生固氮过程中会放Ｈ２，放Ｈ２是种能量浪费．Ｅｖａｎｓ等［１］研究表明：利用具有吸氢酶活性的根瘤菌［ＨＵｐ＋］接种豆科作物能提高固氮效率、增加作物产量．豆科植物根瘤菌的...     

镍-铁氢酶的研究进展

近5年来,不少文章报道了镍-铁氢酶的研究,用生理的、化学的和光谱等方法,已发现许多氢酶含有镍,含镍氢只有镍的EPR特征信号,揭示镍参与氢酶的氧化还原反应,镍可能是结合分子氢的活性部位,在有活性氢酶形成中,镍可能与氢酶的活化或氢酶蛋白合成有关,EXAFS光谱研究发现,气酶中的?直接与硫原子配合,文中还提出镍-铁氢酶有待研究的问题。     

PURIFICATION AND SOME PROPERTIES OF HYDROGENASE FROM AUTOTROPHICALLY CULTURED Rhizobium japonicum

The membrane-bound hydrogenase from autotrophically cultured Rhizobium japonicum cells has been purified and partially characterized. During the purification process it was necessary to exclude O_2, add reducing agents and include the non-ionic detergent Genapol in buffers in order to maintain activity and prevent the enzyme frjom precipitation. The purified enzyme retained 78% of its activity after storage under H_2 at —80℃ for six months. The most highly purified fraction with a specific activity of 142 μmol methylene blue reduced·min~(-1)·mg protein~(-1), showed two major bands on SDS polyacrylamide electrophoresis gels with molecular weights of about 60,000 and 30,000. There was no positive correlation between hydrogenase specific activity and cytochrome b content of fractions obtained from the different steps in the purification process. No cytochrome b could be detected in the fraction with the highest specific activity. Some other characteristics of the hydrogenase from autotrophically cultu