假单胞菌DM11的二氯甲烷脱卤素酶研究──Ⅱ．动力学性质和抑制剂

对来自假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．）ＤＭ１１菌株的二氯甲烷脱卤素酶（简称ＤＭ１１脱卤素酶）的动力学性质和抑制剂进行了研究。用１／Ｖ对１／［ｓ］作图法，测出ＤＭ１１脱卤素酶以ＣＨ２Ｃｌ２、ＣＨ２Ｂｒ２、ＣＨ２Ｉ２、ＣｌＣＨ２Ｂｒ和ＣｌＣＨ２Ｉ等５种化合物为底物时的Ｋｍ值分别是６７、２０、５５、７和９μｍｏｌ／Ｌ，比活力分别是７７．８、１２３．３、７８．８、５６．１和６０．３ｍｋａｔ／ｋｇ蛋白。测定了１４种抑制剂对ＤＭ１１脱卤素酶的５０％抑制浓度（Ｉ５０）。甲基谷胱甘肽（ＧＳＣＨ３）是ＤＭ１１脱卤素酶的竞争性抑制剂，四硝基甲烷（ＴＮＭ）是非竞争性抑制剂，当甲基谷胱甘肽和四硝基甲烷与ＤＭ１１脱卤素酶一起保温时，甲基谷胱甘肽对酶有保护作用。     

阿特拉津氯水解酶基因的定点诱变和酶活力检测

阿特拉津氯水解酶(AtzA)是一种对除草剂的生物降解和环境净化有重要意义的酶．采用定点诱变方法将假单胞菌ADP株的atzA基因第832位碱基(鸟嘌呤)诱变成腺嘌吟，然后将其插入表达载体pET21b( )，并在大肠杆菌中表达．表达的蛋白特性研究表明：AtzA或AtzA—NK融合蛋白系水溶性蛋白，很容易通过Ni—NTA Magnetic Agarose Beads分离纯化．采用阿特拉津脱氯反应产生HCl而引起pH指示剂颜色改变的测定方法能方便地对其酶活力进行定量．酶活力结果表明，突变酶的比活力与假单胞菌ADP菌株的AtzA相比没有明显改变，暗示突变位点(第278位缬氨酸突变成甲硫氨酸)不是酶的活性中心或底物结合部位。     

聚ADP核糖基聚合酶的抑制剂苯甲酰胺在肺癌细胞PG凋亡中的作用

研究了聚ADP核糖基聚合酶（PARP）抑制剂苯甲酰胺（BA）在DNA损伤所造成的肺癌细胞（PG）凋亡过程中的作用,分别用MNNG（N－甲基－N－亚硝基氮亚硝基胍）和BA,以及同时用MNNG和BA处理PG细胞,然后用非放射性细胞增殖测定试剂盒和流式细胞仪测定PG细胞的增殖活性和细胞凋亡的变化,并用免疫组化法检测细胞中Bcl-2蛋白表达的变化,结果表明,在MNNG的作用下细胞的增殖活性受到明显抑制,细胞凋亡显著,Bcl-2蛋白低表达,单独用BA处理PG细胞时,细胞的增殖活性,细胞凋亡数及Bcl-2的表达与空白对照组相似,用BA和MNNG共同处理PG细胞时,细胞的增殖活性,细胞凋亡数及Bcl-2的表达,与对照细胞和BA单独处理的细胞相比均无明显差异,这说明PARP对诱导细胞凋亡起重要作用,而且这种作用可被PARP抑制剂BA所抑制。     

嗜甲基菌DM11菌株的二氯甲烷脱卤素酶是二聚体蛋白

经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测定,嗜甲基菌ＤＭ１１菌株二氯甲烷脱卤素酶的亚基分子量为３１０００。通过沉降平衡超离心分析和凝胶过滤色谱分析证明,上述脱素酶的天然酶的分子量分别是６５８００和６３５００。这些结果表明,ＤＭ１１菌株的二氯甲烷脱卤素酶是二聚体蛋白。     

萘和苯酚降解菌中儿茶酚2，3-双加氧酶基因的类似性分析及杂种酶构建

从7个萘降解菌株和5个苯酚降解菌株中经PcR扩增得到12个儿茶酚2,3-双加氧酶(C23O)基因,大小均为924 bp.根据DNA序列的类似性,可将这12个C23O基因聚类为3组,此结果与分离菌株的样本来源基本一致.这12个基因均编码307个氨基酸残基的儿茶酚2,3-双加氧酶,序列中都含有9个严格保守的氨基酸残基(Gly30、His153、Leu172、His199、His214、His246、Tyr255、Pro259、Glu265),均属于外切双加氧酶的I.2.A亚家族.通过盒式PCR,用各种萘和苯酚降解菌的C23O基因中心区替换恶臭假单胞菌ND6菌株pND6-1质粒中nahH基因的中心区,得到5个杂种C23O基因,这些基因在pET-E.coli BL21(DE3)系统中表达以后,均能检测到C23O活性,其中中心区来自假单胞菌ND24菌株C23O基因的杂种酶C23O-ND24,其比活力高于对照恶臭假单胞菌ND6菌株的野生型C23O.     

谷胱甘肽S—转移酶5—5和细菌二氯甲烷脱卤素酶的性质比较

通过简便的两步阴离子交换色谱，从遗传工程菌株大肠杆菌ＪＭ１０５中纯化出哺乳动物的谷胱甘肽Ｓ－转移酶５－５（ＧＳＴ５－５），ＧＳＴ５－５以二卤甲烷为底物时的动力学常数，热稳定性和最适ｐＨ被测定，并与细菌二氯甲烷脱卤素酶的上述性质进行了比较。     

节杆菌AD1菌株的阿特拉津氯水解酶基因在大肠杆菌中的表达

用PCR方法从节杆菌AD1菌株中扩增出完整的阿特拉津氯水解酶基atzA，该基因与载体pGEM-T连接成重组质粒以后，转化大肠杆菌DH5a，表达出了有活力的阿特拉津氯水解酶。     

降解溴氨酸的鞘氨醇单胞菌N1菌株的固定化研究

用聚乙烯醇(PVA)做载体，用包埋法固定降解溴氨酸(学名为1-氨基-4-溴蒽醌-2磺酸，简称ABA)的鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas sp.)N1菌株，并对固定化菌的制备条件及固定化菌降解溴氨酸的一般性质进行了研究．实验结果表明，细胞固定化以后的溴氨酸降解速度明显高于游离细胞，反应遵循一级反应动力学，反应的最适pH和温度范围明显变宽．固定化细胞的储存稳定性也高于游离细胞，4℃储存50d后，其对溴氨酸的降解率仍在99％以上，而游离细胞仅为7．4％．固定化细胞经过50次重复使用后，对溴氨酸仍具有很高的降解活性．     

产碱杆菌SB1菌株的分离和降解水杨酸的研究

用富集培养法从工业水中分离到一株能以水杨酸为唯一碳源和能源的产碱杆菌ＳＢ１。该菌株在优化培养条件下对水杨酸的降解率可达９９％以上。     

苯胺降解菌的特性研究及分子生物学基础

从长期受苯胺污染环境中筛选到一株细菌NKS．能以苯胺为唯一的碳源、氮源生长．NKS降解苯胺的最适温度和pH分别为30C和7.2，最适苯胺浓度为3000mg／L．NKS还可利用邻苯二酚和邻甲苯胺．提高接种浓度对NKS的降解效果有显著影响，重金属离子对NKS的生长和苯胺降解均有不同程度的抑制作用，以Ag^ ，Hg^ 最明显．对NKS与苯胺降解代谢有关酶类的测定结果表明，NKS中催化邻苯二酚开环的酶主要为邻苯二酚-2，3-双加氧酶(CD23O)．且该酶为诱导酶．PCR结果表明NKS中与苯胺酶降解有关酶的基因位于细菌的染色体上．