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使用RNA-Seq技术,对毕赤酵母进行了转录组测序。基于测序结果,对现有毕赤酵母基因组进行了重注释,修正了基因组序列中的错误位点861处,发现了新转录本249个及可变剪切现象83个,并更正了553个转录本的错误注释。经过表达谱分析,在毕赤酵母中发现了2个新型强启动子,分别命名为P437和P1431,其驱动的转录本的最高转录水平分别为AOX1基因的1.78倍和3.40倍。序列分析显示,P437和P1431序列中存在着多个酵母转录因子的结合位点。 相似文献
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为了研究海洋灰绿曲霉中抗肿瘤聚酮化合物灰绿霉素A的生物合成机制,需获得相关的聚酮合酶基因簇。根据灰绿霉素A合成途径推断,该化合物母核由非还原型PKS(NR-PKS)催化合成,本文使用LC系列简并引物得到灰绿曲霉中NR-PKS基因片段,再通过基因走读技术得到22.8kb的DNA序列,其含有7个完整的开放阅读框。通过BLAST分析,序列中包含1个NRPKS编码基因,全长8 451bp,命名为Agpks1。AgPks1与烟曲霉PksP、黑曲霉Alb1有很高的同源性。该工作对研究Agpks1对灰绿霉素A或其他聚酮产物合成的催化机制具有重要意义。 相似文献
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首先在产酶溶杆菌来源的赖氨酰内切酶（Lys-C）成熟肽序列的N端和C端分别融合人工前肽(MGSK)和6×His标签，将密码子优化后的序列插入表达载体pET-28a；其次以IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）诱导型启动子PT7控制Lys-C的高效表达，并针对重组菌株JM109DE3＿PT7-LysC开展生物反应器高密度发酵生产Lys-C；再次收集和溶解包涵体得到Lys-C变性液，通过Sephadex G25层析脱除DTT（二硫苏糖醇），并在Lys-C复性液中添加前导肽(pre-N-pro)辅助成熟肽蛋白折叠；进一步通过切向流过滤、Ni NTA-Sepharose亲和层析和Sephacryl S-100层析等一系列纯化步骤，获得高纯度的重组Lys-C；最后进行酶切三肽底物和门冬胰岛素前体检测，分析重组Lys-C的活性水平。结果表明：重组Lys-C的发酵产量为2.4 g/L，经复性和纯化后的终产量可达48 mg/L；添加80 mg/L pre-N-pro促进了重组Lys-C的复性，复性后酶活相比于未添加pre-N-pro时提升了4.8倍，最高可达到13.8 U/L；经过多步纯化后，重组Lys-C的... 相似文献
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