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1.
本文报告用T_4RNA连接酶将相应于酵母丙氨酸转移核糖核酸(tRNA_y~(Ala))3′-半分子(36—76)的三个寡核昔酸大片段——10(36—45)(Ⅰ),12(46—57)(Ⅱ)和19p(58—76)(Ⅲ)——从3′-端向5′-端延伸逐个连接合成了这个tRNA的3′-半分子(36—76)。首先在供受体配比为1:1.5的情况下,采取三步连续反应,即19p(Ⅲ)的5′-磷酸化,然后与12(Ⅱ)的连接和连接反应产物的5′-磷酸化等反应,一次制备分离的方法,以70%的总得率合成了5′-磷酸化的三十一核苷酸(46—76)(Ⅳ)。然后,以(Ⅳ)作为下一步反应的供体和三倍量的10(Ⅰ)连接,以67%的产率合成了具有四十一核苷酸的tRNA_y~(Ala)的3′-半分子(36—76)(Ⅴ)。将这个合成的3′-半分子,5′-磷酸化以后,与天然的5′-半分子连接,人工半合成了tRNA_y~(Ala)整分子,经生物活力测定,这个人工半合成的tRNA_y~(Ala)具有接受[~3H]-丙氨酸、并能将接受的丙氨酸转移到蛋白质分子中去的生物活力。 相似文献
2.
T4-RNA连接酶自1972年由Silber等人发现以来,已有不少的研究结果说明,T4-RNA连接酶在没有模板的情况下,能有效地催化RNA5′-端磷酸与3′-端羟基形成分子内或分子间的磷酸二酯键。它亦催化DNA之间,或RNA与DNA之间的连接反应。在酶的分离纯化方面,亦相继进行了不少的研究工作,并有了改进,可以比较容易地获得较大量的一定纯度的制品,给研究工作提供方便与可能。它是一种有用的工具酶被用来合成具有确定顺序的多核苷酸 相似文献
3.
为了提高重组导向溶栓分子scFv-UK32的溶纤活性,通过重组PCR方法在编码scFv与UK32的碱基之间引入编码KLGGGG连接肽的碱基序列,并克隆到转移载体pBacPAK9上,通过与线性病毒DNA BacPAK6/Bsu36I digest共转染到昆虫细胞Sf 9内,进行表达.表达产物分泌到上清中,共转染后第5d(天)用纤维平板法测得Sf 9细胞上清溶纤活性达到107 IU/mL,比未引入连接肽的scFv-UK32的表达活性(25 IU/mL)高.ELISA实验表明共转染上清具有明显对活化血小板特异结合能力.Western Blotting实验表明共转染上清可与Pro-UK的单抗特异结合. 相似文献
4.
孵化40小时鸡胚以铅块遮盖,蛋清接受20250仑X线照射,能够对鸡胚发育产生有害的距离效应,孵化期间胚胎大量死亡,孵化率下降至20%左右,若在孵化前照射蛋清,孵化后对鸡胚亦产生致命性影响,当然,损伤的程度较之孵化后照射略轻,蛋清受照射的早期胚胎的卵黄囊血管区发育不良,血管细弱,血液颜色暗淡,死亡个体多伴有血管破裂、出血和溶血,胚胎出现迟育现象,表现为体形弱小,体节分化受到抑制,并伴随以S~(35)-蛋氨酸掺入为指标的胚胎代谢强度的下降,这些现象,与射线直接照射鸡胚的损伤效应有 许多基本相同之处,交换蛋清的实验证明,X线对鸡胚发育的距离效应,主要是通过受照射蛋清系统这一中间环节而实现的。 相似文献
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为了提高重组导向溶栓分子scFv-UK32的溶纤活性,通过重组PCR方法在编码scFv与UK32的碱基之间引入编码KLGGGG连接肽的碱基序列,并克隆到转移载体pBacPAK9上,通过与线性病毒DNA BacPAK6/Bsu36I digest共转染到昆虫细胞Sf 9内,进行表达。表达产物分泌到上清中,共转染后第5d(天)用纤维平板法测得Sf 9细胞上清溶纤活性达到107 IU/mL,比未引入连接肽的scFv-UK32的表达活性(25 IU/mL)高。ELISA实验表明共转染上清具有明显对活化血小板特异结合能力。Western Blotting实验表明共转染上清可与Pro-UK的单抗特异结合。 相似文献
6.
将人尿激酶原(pro-UK)cDNA分别插入家蚕核型多角体病毒转移载体pBK283和pBF4中,构建成两个重组质粒。所构建的这两个重组质粒与野生型家蚕核型多角体病毒DNA(BmNPV genomic DNA)共转染家蚕培养细胞,经病毒斑实验(Plaque assay)筛选出含pro-UK cDNA的稳定重组病毒株BmNPV-pk1和BmNPV-pk2。将此两株重组病毒分别感染家蚕培养细胞和家蚕幼虫4天后,用酶联免疫测定法(ELISA),纤维蛋白平板溶圈测活法和Western印迹法分析细胞培养上清及细胞和家蚕的体液及组织,证实均有pro-UK表达。家蚕培养细胞的表达量分别为0.0012mg/mL(上清液和10~6细胞)和0.0031mg/mL(上清液和10~6细胞),家蚕幼虫体液的表达量分别为0.0100mg/mL和0.0300mg/mL。从以上结果可看出,家蚕幼虫体液的表达量是培养细胞的10倍,以上表达产物在纤维蛋白平板上测活均有溶纤活性。 相似文献
7.
T_4RNA连接酶首先由Silber等人在T_4噬菌体感染的E.Coli中发现和初步提纯的。当ATP存在时,它能够催化一定链长的单链寡聚核苷酸5′一端磷酸单酯与3′一端羟基之间形成分子内或分子间的3′,5′磷酸二酯键。RNA连接酶能催化3′,5′二磷酸核苷与寡核苷酸受体相连接。此反应可用于一定序列寡核苷酸的合成,和核苷酸3′一端的同位 相似文献
8.
本文将人尿激酶原(pro-UK)cDNA基因插入到含β-肌动蛋白(actin)启动子的表达载体中,通过脂质体转化到中国仓鼠卵巢(CHO)细胞内,经筛选得到稳定表达pro-UK基因的细胞株,用ELISA检测到细胞培养液中表达量为2~3mg/L。经过抗尿激酶(UK)的免疫亲和柱初步纯化细胞培养上清后得到表达产物。同时,在培养液中加入佛波酯PMA后,发现它对目的基因的表达有促进作用。 相似文献
9.
带有表达质粒pBV220/PAI-1的大肠杆菌中,在菌体密度为A600nm=0.3--0.4时诱导,表达重组PAI-1(rPAI-1)的效率最高。在诱导后的6h以内,rPAI-1的百分含量持续升高。rPAI-1经分离纯化并用盐酸胍激活后,能够与t-PA及u-PA反应,用SDS-PAGE和纤维蛋白自显影方法可以检测出它们所形成的复合物。 相似文献
10.
人胰岛素原类似物(B-Arg-Arg-A)基因的构建和表达 总被引:3,自引:0,他引:3
用聚合酶链反应(PCR)法将C肽为6个氨基酸残基的胰岛素原类似物基因删除突变成C肽仅为2个精氨酸残基的胰岛素原类似物(BArg-Arg-A)基因,即把pUC18BC'A改建为pUC18BR2A。再将pUC18BR2A与pJG105重组为表达质粒pJG107,使B-Arg-Arg-A与pJG105编码的一种多肽构成融合蛋白在大肠杆菌体系中表达。融合蛋白占细菌蛋白总量的58%。表达产物具有人胰岛素放射免疫活性。 相似文献