牛泡沫病毒BFV3026 gag基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

从牛泡沫病毒BFV3026感染的胎牛肺细胞中提取Hirt DNA,PCR扩增BFV3026　gag基因。序列分析确证后，将其克隆于原核表达载体pET32A，重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导，使Gag蛋白得以高效表达。SDS－PAGE及Western blot证实：表达蛋白占菌体总蛋白的40%，本工作的完成为Gag蛋白功能的研究奠定基础。     

利用蛋白质组学技术筛选与BIV基质蛋白MA相互作用蛋白

牛免疫缺陷病毒BIV的基质蛋白MA是由gag基因编码病毒结构蛋白之一,参与病毒运输包装等多种过程.通过蛋白质组学方法,寻找与MA有相互作用的宿主蛋白.通过原核表达MA-CBP融合蛋白,将其结合在几丁质上,并与细胞裂解物混合,纯化特异结合的细胞蛋白.利用双向电泳以及MALDI-TOF质谱分析,筛选到8个与MA具有相互作用的候选蛋白,功能涉及运输、氧化还原、热激反应等.进而克隆所鉴定蛋白之一的PRDX4,利用体外结合实验进一步证实其与BIV MA蛋白存在相互作用.初步建立利用蛋白质组学技术研究病毒与宿主相互作用实验方法,所得结果为了解慢病毒结构蛋白在病毒生活周期中功能提供了线索,有助于探索过氧化物酶家族蛋白在病毒感染过程中的作用及其分子机制.     

感染性嵌合病毒SHIV cDNA的构建及活性筛选

以感染性克隆SHIV-KB9 cDNA为主要骨架，将其env基因区域的gp120和部分gp41(从N末端的50到650个氨基酸)的1．7kb片段，用来源于4个不同中国HIV-1 B’／C毒株env的相应区域进行替换，构建了50个全基因SHIV cDNA克隆，大规模体外活性筛选实验，获得了能够在人的PBMC中进行生产性复制的SHIV-XJ02170 cDNA克隆．     

引起人非典型性肺炎的冠状病毒基因组与其它冠状病毒基因组的初步比较

一种在世界范围内突然爆发的致命流行病——急性呼吸窘迫综合症(SARS)击倒了数干人，一种全新的冠状病毒被认为是其病原．5个SARS相关冠状病毒的全基因组序列已经完成．我们进行了SARS相关冠状病毒和其它冠状病毒的基因组进化分析和序列比较，结果显示：1．SARS相关冠状病毒不直接来自于任何已知的冠状病毒；2．E蛋白的基因可能是在近期从其它病毒横向转移到SARS病毒中来的；3．Sl和S2基因发生了较大范围的缺失或插入突变．这些基因横向转移和突变改变了SARS相关病毒的表面结构和抗原性，极有可能是导致其获得侵染人类细胞的主要原因．     

用多克隆抗体检测干扰素调节因子7的表达

干扰素调节因子7(IRF-7)是调节Ⅰ型干扰素依赖型先天免疫反应的关键因子,在真核细胞防御反应中发挥重要作用。本文在大肠杆菌中表达了重组IRF-7,利用亲和层析的方法进行了纯化,并制备了鼠抗IRF-7的多克隆抗体。所得到的抗血清能够在稀释27 000倍后成功用于免疫印迹检测。该抗血清不但能识别来源于大肠杆菌的抗原,还能检测真核细胞内转染后表达的IRF-7。使用该抗体证实,转染293T细胞后表达的IRF-7主要分布在细胞质内。所制备的抗血清可用于IRF-7的表达和功能研究。     

牛泡沫病毒LTR的反式激活因子靶序列研究

牛泡沫病毒（ＢＦＶ）是反转录病毒科泡沫病毒属成员之一．其基因组除编码ｇａｇ,ｐｏｌ,ｅｎｖ三个结构基因外,在ｅｎｖ和３＇ＬＴＲ之间有２个ＯＲＦ（ＯＲＦ－１和ＯＲＦ－２）,编码自身的反式激活因子Ｔａｓ等调节蛋白．本研究利用我们实验室分离鉴定的ＢＦＶ３０２６中国毒株［１２］为材料,克隆Ｏｒｆ－１基因,构建ｐＢＦＶＯＲＦ－１表达质粒,通过带有ｌｕｃ基因的ＬＴＲ系列缺失质粒与ｐＢＦＶＯＲＦ－１共转染,瞬时表达分析结果将ＢＦＶＬＴＲ上Ｔａｓ应答元件（ＴＲＥ）定位于－９８３／－６６８（ＴＲＥＩ）,－４７０／－１４０（ＴＲＥＩ）和ＲＵ５区．其中ＴＲＥＩ、ＴＲＥＩＩ为正调控区域,ＲＵ５为负调控区域,并进一步证明ＲＵ５在异源启动子（ＢＩＶＬＴＲ）上具有抑制其下游基因表达的功能．这些结果表明ＢＦＶＴａｓ作用机理与慢病毒（Ｔａｔ）,致瘤病毒（Ｔａｘ）等均不相同     

大肠杆菌O96 O-抗原基因簇的破译和特异基因的鉴定

大肠杆菌O96血清型的大肠杆菌近年来频繁地出现于分离到的致病菌株中,在发展中国家和发达国家均有发现,有造成爆发性流行的可能．本文利用鸟枪法对大肠杆菌O960～抗原基因族进行测序,序列全长9415bp,用生物信息学的方法进行序列分析,共发现7个基因,分别是：吡喃型UDP-半乳糖变位酶基因(glf),O-抗原转运酶基因(wzx),O-抗原聚合酶基因(wzy)和糖基转移酶基因(4个)．本文分析了大肠杆菌O96和K12(016)的O-抗原基因族中吡喃型UDP-半乳糖变位酶基因和O-抗原转运酶基因的进化关系,确定了吡喃型UDP-半乳糖变位酶的基序;用PCR的方法筛选出了2个针对大肠杆菌O96的特异基因,可以用于基因芯片或PCR方法快速检测大肠杆菌O96。     

牛泡沫病毒转录激活因子Borf1影响细胞周期相关基因的表达

Borf1蛋白是牛泡沫病毒编码的转录激活因子,可影响其自身及病毒结构基因的表达.但目前对Borf1在宿主细胞周期上的作用还未见研究报道.通过建立人胚肾293稳定表达Borf1的细胞系来研究其对宿主细胞的影响表明,在细胞内稳定表达Borf1可显著引发细胞在G1/G0的阻滞,并且降低S期细胞的比例.用半定量RT-PCR分析发现,Borf1可在mRNA水平下调周期蛋白cyclin A2,cyclin B1和cyclin E的表达.蛋白水平检测进一步核实这一结果.因此,Borf1通过影响周期相关蛋白表达,在G2-M及G1-S限制位点上发挥作用,进而引发细胞G1期阻抑.     

相信科学征服SARS

在人类社会发展历史上,出现过许多疾病,如天花、流行性腮腺炎、麻风病、流行性脊髓灰质炎(小儿麻痹症)、结核病等都曾严重危害人类健康,但都被人类控制或消灭,SARS同样也可被人类所征服。病毒是人类最古老的敌人,人类与病毒的斗争会长期存在下去,高枕无忧的时代还没有到来。不过,每一次重大危机的出现也常常成为人类进步的契机。