茶树草螺菌WT00C-Se发酵制备红色纳米单质硒

茶树草螺菌是从野外茶树中分离的一种革兰氏阴性内生细菌。茶树内生草螺菌WT00C在含200 mmol/L硒酸钠的LB培养基内37℃培养28 h后,收获、保存细菌并重新命名为茶树草螺菌WT00C-Se。将茶树草螺菌WT00C-Se重新接种至含200 mmol/L硒酸钠的LB培养基中培养,其生长抑制期和生长期缩短6 h,仅为原来茶树内生草螺菌WT00C菌株的一半。摇瓶培养和电镜观察都表明茶树草螺菌WT00C-Se仍拥有还原硒酸盐、生成红色纳米单质硒(Se~0)的能力。根据茶树草螺菌WT00C-Se的特性,进行红色纳米单质硒产率条件优化后发现:首先用含75 mmol/L硒酸钠的培养基活化茶树草螺菌WT00C-Se,然后按1∶100比例接种200 mmol/L硒酸钠LB培养基,并在37℃、200 r/min、pH 7. 0条件下培养,红色纳米单质硒产率较高且耗时短。依照优化条件,使用发酵罐发酵30 h,每升培养物可制备出560 mg纯净的红色单质硒。该研究结果不仅为利用微生物生产红色单质硒提供了一种全新的思路,而且为今后产业化提供了强有力的技术支撑。     

E.coli酪氨酸转氨酶的纯化与非天然氨基酸的底物特异性检测

构建重组菌株E.coliBL21(DE3)转pET23a-tyrB,IPTG诱导其大量表达,然后依次通过盐析、离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析获得纯酶,运用薄层层析技术(TLC)检测,结果表明纯化的TyrAT转氨酶对自身底物酪氨酸在37℃和50℃具有较高活性.分别加入非天然氨基酸L-正缬氨酸、L-新戊基甘氨酸、L-叔亮氨酸、D-正亮氨酸作为底物,检测到TyrAT转氨酶对L-叔亮氨酸在50℃下有活性,对D-正亮氨酸在37℃和50℃均有催化活性,且50℃下效果更好.     

假单胞菌593多铜氧化酶CopA的漆酶活性研究

从假单胞菌593中克隆出多铜氧化酶copA基因,并将其转入大肠杆菌BL21(DE3) p Lys S过量表达和纯化.纯化的CopA蛋白展示出漆酶活性,针对漆酶的3种底物ABTS、DMP、SGZ,CopA的最适反应pH分别是3. 5、7. 5和7. 5,最适反应温度分别是50℃、50℃和42℃.pH稳定性和热稳定研究发现,在pH 7. 0条件下,CopA比较稳定,在温度大于42℃保存该蛋白,其活性降低较快.二价金属离子影响实验发现,CopA漆酶活性能被二价铜离子显著加强.酶动力学常数实验结果展示,CopA作用于底物ABTS,K_m为0. 281 mmol/L,V_(max)为3. 02×10~(-3)mmol·L~(-1)·min~(-1),k_(cat)为1. 8 s~(-1); CopA作用于底物DMP,K_m为0. 141 mmol/L,V_(max)为4. 54×10~(-3)mmol·L~(-1)·min~(-1),k_(cat)为2. 2 s~(-1); CopA作用于底物SGZ,K_m为0. 025 mmol/L,V_(max)等于0. 7×10~(-3)mmol·L~(-1)·min~(-1),k_(cat)为0. 87 s~(-1).     

磷脂酰胆碱缺失影响丁香假单胞杆菌Ⅲ型分泌系统装置的完整性

丁香假单胞杆菌1336致病菌缺失pcs基因后不能合成磷脂酰胆碱(PC),也不能诱发植物的超敏反应(HR).从它的基因组中分别克隆出25个T3SS-相关基因,包括编码组件蛋白和表达调控基因.在E.coli中成功表达了其中19个基因,并且纯化出16种蛋白.在野生型和pcs~-突变型中,无论是编码T3SS组件蛋白基因、调节基因还是效应蛋白基因的转录水平都没有呈现显著性差异.与野生型比较,1336 pcs~-突变型细胞质中14个T3SS-关联蛋白的相对量也没有显著性差异,但细胞膜中的HrpB、HrpE、HrpF和Hrc J相对量都减少约10%.36%T3SS组件蛋白同时减少可能导致T3SS装置不完整,而这种有缺陷的T3SS装置不能行使正常生理功能.由此可见,膜磷脂中的PC在丁香假单胞杆菌T3SS装置组装过程中起着十分重要的作用.     

大肠杆菌氨基转移酶的非天然氨基酸底物特异性研究

氨基转移酶催化L-氨基酸和α-酮酸之间的氨基转移.TLC(薄层层析)和甲臜颜色反应检测大肠杆菌4种氨基转移酶(TyrAT、IlvAT、AspAT和AvtAT)催化6种非天然氨基酸的转氨活性,发现AvtAT和AspAT无非天然氨基酸转氨活性.TyrAT能催化DL-高苯丙氨酸、L-正亮氨酸和L-正缬氨酸的转氨反应,而Ilv...     

MG-132诱导宫颈癌细胞表达HPV病毒蛋白E6和E7

使用不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG-132处理官颈癌细胞系CaSki和HeLa S3细胞,WesternBlot检测发现2-5 mg/L MG-132 37℃处理3 h明显增强CaSki细胞中人类乳头瘤病毒HPV E6和E7蛋白的表达量,增加MG-132浓度或延长处理时间并未见E6和E7蛋白量的增加.用相同的方法处理HeLa s3细胞,也观察到HPV E7蛋白的增加.XTT活细胞分析和台盼蓝死细胞检测显示2 mg/L MG-132处理癌细胞3 h,其细胞死亡率10%.这一发现将有可能协助提高以E6、E7蛋白作靶位点的生物导弹疗法的效果.     

F15L和K207E突变与Borrelia螺旋菌磷脂酰胆碱合成酶的生物活性

磷脂酰胆碱合成酶是磷脂酰胆碱合成酶(PCS)途径中的关键酶.根据Borrelia burgdorferiBB0249ORF的DNA序列设计引物对,从B.afzelii总DNA中扩增出一段660 bp DNA.序列分析发现扩增的DNA片段编码的蛋白中仅两个氨基酸(L15和E207)不同于B.burgdorferiBB0249 ORF编码的蛋白(F15和K207).将克隆的基因插入pET表达载体,并在大肠杆菌中表达.在活体中进行的活性分析发现,克隆的DNA片段编码的蛋白质能利用外源的胆碱和大肠杆菌细胞内的CDP-二酰基甘油合成磷脂酰胆碱(PC),表明螺旋菌磷脂酰胆碱合成酶15位的苯丙氨酸和207位赖氨酸残基分别被亮氨酸和谷氨酸替代并不影响磷脂酰胆碱合成酶的活性.     

推定的BB0462蛋白增强oppAⅤ启动子的转录活性

Borrelia burgdorferi基因组中BB0462 ORF编码一种由110个氨基酸组成的未知功能BB0462蛋白．使用推定的氨基酸序列在蛋白库中进行Blast比对以及推定蛋白的二级结构预测的结果都显示BB0462蛋白与YhaB家族的蛋白类似．共转化后β-半乳糖苷酶活性分析发现BB0462蛋白增强了B．burgdorferi lp54质粒携带的oppAⅤ上游调控区的转录活性，而对其他4个oppAⅠ～Ⅳ上游调控区调控区的转录活性没有影响．利用纯化的BB0462融合蛋白在体外分别与oppAⅠ～Ⅴ调控区DNA片段进行凝胶阻滞分析，发现BB0462蛋白仅与邻近oppAⅤ基因转录起始点的一段409bp上游调控区DNA结合．用未标记的oppAⅤ上游调控区DNA与DIG-标记的oppAⅤ上游调控区DNA竞争BB0462蛋白，使凝胶上的DNA迁移阻滞带完全消失．β-半乳糖苷酶活性分析和凝胶阻滞分析表明BB0462蛋白在oppAⅤ基因表达的转录调控中可能起重要作用．     

β-甘露聚糖酶产生菌的鉴定及其粗酶性质的研究

从土壤中分离得到一株产β-甘露聚糖酶菌株.16SrDNA序列分析结合常规细菌形态学分析表明,该细菌属于芽孢杆菌菌(Bacillus)属,并命名为Bacillus sp.102.该菌株产酶高及迅速,且粗酶液中甘露聚糖酶的量占绝对优势.薄板层析显示粗酶水解魔芋甘露聚糖和角豆胶产物以甘露寡糖为主.对酶性质的研究发现,酶的最适反应温度为50℃,最适pH值为9.0,在pH值为中性时能保持很好的稳定性,有在碱性条件下的工业应用潜力.