一株生孢噬纤维菌的纤维素酶的定位研究

生孢噬纤维细菌Sporocytophaga sp.JL-01是能够降解纤维素的滑动细菌, 通过对该菌株发酵上清液、荚膜液、超声波破碎后的上清液、破碎细胞碎片及完整细胞的CMC酶活、滤纸酶活的研究,对其所产生的纤维素酶在细胞上的定位进行了研究.结果显示:生孢噬纤维细菌Sporocytophaga sp.JL-01可通过细胞质膜向细胞外分泌CMC酶,而其滤纸纤维素酶则存在于细胞质膜上.     

生孢噬纤维细菌CMC酶的酶学性质研究

从生孢噬纤维细菌(Sporocytophaga)的发酵上清液中分离纯化得到了一个具有CMC酶活性的组分.研究表明:该CMC酶组分的相对分子质量为8.2×104;其最适反应温度为50℃,最适反应pH值为5.0;Zn2+对该CMC酶有抑制作用,Fe2+对该酶有微弱的促进作用;该CMC酶组分的CD光谱显示,β折叠结构是该CMC酶具有酶活的天然构象的主要结构.     

布鲁菌wzt基因的原核表达及生物信息学分析

利用PCR技术克隆wzt基因并对其进行了原核表达,采用SDS-PAGE和Western Blotting进行了检验,运用Clustalx1.83和Mega5.0进行了同源性分析,在此基础上,利用Discovery Studio 2.5软件进行了结构预测,探讨了wzt基因表达产物的分子基本特征.结果表明:本研究克隆了756bp的目的片段,经原核表达得到了相对分子质量约28 000的目的蛋白,该蛋白经HisTrapTMFF亲和层析柱纯化以及Western Blotting鉴定,证明为具有His标签的外源蛋白;系统树分析表明,布鲁菌wzt蛋白属内高度保守;结构分析表明,其具有8个α螺旋、7个β折叠片层结构域.