杀鲑气单胞菌溶血素和菌毛蛋白的重组表达及其免疫保护效果研究

为探究杀鲑气单胞菌溶血素和菌毛蛋白能否作为亚单位疫苗候选抗原,本研究针对前期分离的杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种(Aeromonas salmonicida subsp.masoucida, ASM),利用原核表达系统对其进行重组表达,免疫虹鳟后检测其免疫保护效果与诱导的免疫应答特征。Western-blotting结果显示,虹鳟抗灭活ASM血清可与2种重组蛋白发生阳性反应,说明其具有较好的免疫原性。免疫保护实验结果显示,重组溶血素、重组菌毛蛋白及两者混合物免疫对虹鳟的相对免疫保护率(Relative Percentage Survival, RPS)分别为64.6%、37.5%和75.0%;ELISA检测发现,重组溶血素和重组菌毛蛋白单独免疫以及两者混合免疫均能有效诱导虹鳟产生抗各抗原的特异性抗体,在免疫2周后特异性抗体水平均显著高于对照组(P0.05),其中混合免疫组虹鳟血清中抗重组溶血素抗体水平显著高于重组溶血素单独免疫组,但其诱导产生的抗重组菌毛蛋白抗体水平与重组菌毛蛋白单独免疫组无显著性差异;荧光定量PCR检测结果显示,3个免疫组中IL-6、IL-8、TCR及CD4基因的表达水平均显著高于PBS对照组,其中重组溶血素与重组菌毛蛋白共免疫组中IL-6、CD4、MHC-Ⅱ及IgM基因表达水平显著高于其他免疫组。研究结果表明,重组溶血素对虹鳟具有较好的免疫保护效果,且提示重组菌毛蛋白具有开发成为佐剂分子的潜在价值,该结果可为杀鲑气单胞菌亚单位疫苗的研制及应用提供了重要参考。     

南非斑节对虾肠道组织结构及菌群特征、代谢活性研究

为阐述南非斑节对虾(Penaeus monodon)在工厂化养殖模式中肠道微生物的作用,本研究基于HE染色组织切片、高通量测序、Biolog ECO技术,探讨工厂化养殖模式中南非斑节对虾肠道组织结构形态、菌群特征及肠道微生物代谢活性。结果显示,南非斑节对虾肠道组织结构类似于凡纳滨对虾,肠壁结构薄且清晰,肠上皮细胞紧密连接,微绒毛排列整齐、致密,外层结缔组织厚,可见血窦分布。通过Operational Taxonomy Unit(OTU)数量、Chao 1、Simpson、Shannon指数呈现了南非斑节对虾肠道菌群丰富度和多样性变化,测序数据合理;肠道菌群结构中门类主要包括变形菌门Proteobacteria、浮霉菌门Planctomycetes、放线菌门Actinobacteria、疣微菌门Verrucomicrobia;目水平中含量最高的是红杆菌目Rhodobacterales,其次是浮霉菌目Planctomycetales;属水平上含量表现为unclassified鲁杰氏菌属Ruegeria玫瑰变色菌属Roseovarius等,物种热图分析呈现相同结果。通过平均吸光值(Average Well Color Development,AWCD)显示肠道微生物代谢活性总体变化趋势,24h微生物代谢活性较弱,随时间的延长,代谢活性逐渐增加,直至144h后趋于平稳。本研究分析了南非斑节对虾肠道特征,为后续研究及健康养殖提供理论依据。     

海水青鳉仔稚幼鱼发育的研究

【目的】系统掌握海水青鳉Oryzias melastigma早期发育各个阶段的形态特征。【方法】对海水青鳉仔稚幼鱼的生长发育进行连续观察和研究。【结果】在水温26~28℃,盐度27‰,14h光照∶10h黑暗的条件下,海水青鳉0日龄胸鳍发达、眼球浓黑、脊索末端向上弯曲、尾鳍条出现;1日龄鳔充气,并开口摄食;3日龄卵黄吸收完毕;4日龄油球消失,进入后期仔鱼阶段;8日龄胸鳍、臀鳍条出现;10日龄背鳍出现;25日龄各鳍发育,进入稚鱼期;35日龄各个鳍条发育完善,身体布满鳞片,形态与成鱼相似,进入幼鱼期。【结论】根据卵黄囊、油球的吸收,鳍的发育以及鳞片等发育特征将海水青鳉早期发育阶段划分为仔鱼期、稚鱼期、幼鱼期。海水青鳉各鳍的发育时序为胸鳍、尾鳍、臀鳍、背鳍、腹鳍。     

探究一道希望杯竞赛题

第二十三届希望杯全国数学邀请赛高一第一试试题中有这样一道最值题：     

盐度胁迫对非洲斑节对虾生理特征的影响

为探讨不同盐度梯度下非洲斑节对虾(Penaeus monodon)的盐度耐受性,本研究测定了盐度胁迫下对虾生长、渗透、抗氧化及消化指标的变化.实验设置4个盐度梯度(20,30,40,50),以30盐度组作为对照,进行为期35 d的喂养实验.实验结束时计算增重率(Weight Gain Rate,WGR)、特定生长率(S...     

一种复方中草药免疫增强剂对牙鲆免疫力及抗病力的影响

为研究中草药复方制剂对牙鲆Paralichthys olivaceus免疫力及抗病力的影响,实验基于中草药药物功效与配伍原则,研制出一种复方中草药免疫增强剂(YLK),配方包含黄芪、茯苓、党参、蒲公英、鱼腥草、白花蛇舌草、金银花、玉竹、甘草、五味子等;将复方中草药分别以1%(W∶W)和3%(W∶W)的添加量拌入基础配合饲料中,连续投喂牙鲆30d,然后用迟钝爱德华氏菌Edwardsiella tarda攻毒,分别于攻毒后24h和72h取鱼血清进行免疫相关酶活性测定,同时在攻毒后6,12,24,48,72h取鱼脾脏进行免疫相关基因表达水平的检测,并观察记录鱼体的累计死亡情况。结果表明,在迟钝爱德华氏菌感染后24h和72h,3%中草药添加组的牙鲆血清中碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)、酸性磷酸酶(Acid Phosphatase,ACP)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)以及溶菌酶(Lysozyme,LSZ)活性水平均显著高于仅投喂基础饲料的对照组;1%中草药添加组除ALP活性以外,其他3种酶活水平也显著高于对照组(P0.05),2组不同中草药添加组鱼体血清酶活整体上差异不显著性;荧光定量PCR检测结果显示,各投喂组牙鲆脾脏组织中白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、TCRα受体及C型溶菌酶基因表达量均出现不同程度的上调,而2个中草药投喂组牙鲆在感染后多个时间点的基因表达水平均高于单独投喂饲料组的牙鲆(P0.05);添加3%中草药和1%中草药对牙鲆抗迟钝爱德华氏菌感染的相对保护率分别为34.2%和26.3%。研制的复方中草药制剂具有明显的免疫增强效果,能显著提高牙鲆抗迟钝爱德华氏菌感染能力,研究结果将为水产养殖中草药防病技术研究提供重要参考。