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通过改造原核表达载体p B V220 和p E T28,构建出了一种新的通用型温控原核表达载体p V V5,该载体携带 Pr Pl串联温控启动子以及 His Tag 的纯化标签,利于目的蛋白的表达与纯化将 H I V1 gag 基因的11481857 编码序列分别插入到p V V5b、p E T28b 的相应位点,构建了重组表达质粒 p E G1b、p B G7b,二者在不同受体菌中,表达重组蛋白的量分别占全菌体蛋白总量的 42% 和28% 表达产物为融合蛋白并主要以包涵体的形式存在 该蛋白 N 端与含6 个组氨酸在内的30 个氨基酸残基的多肽相连,利用 I M A C金属螯和层析柱,对包涵体中的重组p24 蛋白进行纯化, 其纯度超过 80% ;对上清中的可溶性p24 蛋白进行纯化,产物最终纯度超过67% 纯化后的重组蛋白可与 H I V1 型标准阳性血清发生较强的免疫学反应 相似文献
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致弱I型MDV pp38基因同源物的克隆和序列分析 总被引:3,自引:0,他引:3
将致弱I型马立克病病毒(MDV)感染的细胞基因组DNA的EcoRI酶切产物建于pUC18质粒载体文库中,以digoxingenin标记的含有中毒GA株MDVpp38基因克隆片段作为探针,进行了原位杂交反应,初步筛选出阳性重组质粒,进一步用EcRI酶切分析筛选到含pp38基因同源物的重组pUC18质粒,序列人析表明该pp38基因同源物与pp38基因有极高的同源性,仅有1个碱基突变并导致1个氨基酸的夫 相似文献
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致弱Ⅰ型MDV pp38基因同源物的克隆和序列分析 总被引:6,自引:0,他引:6
将致弱Ⅰ型马立克氏病病毒(MDV)感染的细胞基因组DNA的EcoRⅠ酶切产物建于Puc18质粒载体文库中,以digoxingenin标记的含有强毒GA株MDV pp38基因克隆片段作为探针,进行原位杂交反应,初步筛选出阳性重组质粒,进一步用EcoRⅠ酶切分析筛选到含pp38基因同源物的重组Puc18质粒. 序列分析表明该pp38基因同源物与pp38基因有极高的同源性,仅有1个碱基突变并导致1个氨基酸的替换. 相似文献
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用PCR技术,从马立克氏病病毒CVI988/C株感染的鸡胚成纤维细胞基因组DNA中扩增出含起始密码子的pp38基因同源物编码序列,在Southern blotting中,pp38基因探针能识别为该PCR扩增片段。将该扩增片段克隆进pUC18质粒载体,并进行了全序列分析,进一步将该基因克隆入转移载体pBascPAK8中,得到重组转移载体质粒,经酶切分析和Southern blotting确证了插入方向和正确性,以重组转移载体与经CunⅠ酶切线性化的亲本病毒DNA通过脂质体法共转染家蚕细胞,通过白斑结合点杂交,筛选出纯化的重组病毒,用间接荧光抗体试验检查重组病毒感染的家蚕细胞,可见感染细菌的胞浆及胞膜出现强荧光反应。 相似文献
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通过断食给水、给食断水和断食断水三种方式相互对照 ,对家蝇成蝇进行了饥渴应激耐受实验 .结果发现 ,在饥渴应激压力下 ,无论是开始出现死亡的时间、死亡高峰开始出现的时间 ,还是 50 %或 95%家蝇个体死亡所需时间均表现为雌蝇比雄蝇明显滞后 ,表明雌蝇的饥渴应激耐受力明显强于雄蝇 .这将为丰富对家蝇的认识提供基本资料 ,同时对家蝇的利用和防制也将具有理论与实践意义 相似文献
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以HIV-1 p24gag 与hIL-6 基因在重组痘苗病毒中的共表达研究为目的,将痘苗病毒复制非必需区血凝素(HA) 基因作为侧翼,把编码人白细胞介素6(hIL-6)的基因片段克隆到真核表达质粒p16QF1 -24 的下游,构建成含有HIV- 1p24gag 和hIL-6 两种外源基因的重组表达质粒p16QF24 -IL6 ,经同源重组和血凝素阴性空斑筛选,获得了重组痘苗病毒v16QF24 -IL6.经间接免疫荧光试验、Dot- ELISA 和Western bolt 等检测证明,重组病毒能同时表达p24gag 蛋白和IL-6 蛋白,表达产物的相对分子质量分别为2-4×104 ,2-6×104 .此种方式表达的外源蛋白持续释放,可产生更强的免疫效果,可望用于HIV疫苗的研究. 相似文献
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应用DNA重组技术构建了猪瘟病毒E2 基因与IL 2基因的双表达真核表达载体 ,观察其表达水平 ,并对其免疫增强效果进行了观察。结果是构建了猪瘟病毒E2 基因与白细胞介素 2的真核表达质粒pIRSTIL 2。将质粒转染BHK 2 1细胞 ,可在体外表达E2 和有生物活性IL 2。pIRSTIL 2质粒能诱导产生CSFV的特异性免疫反应。pIRSTIL 2所诱导的免疫应答反应比使用单表达质粒pIRST强。实验表明 :IL 2与猪瘟病毒E2 基因构建的双表达基因疫苗能有效提高基因疫苗的免疫效果 相似文献
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