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采用抑制性差减杂交（Suppression Subtractive Hybridization, SSH）方法,构建正常和热激小鼠睾丸组织的差减 cDNA 文库,以期
筛选出小鼠生精过程中对热敏感的基因。分别从正常和热激小鼠睾丸组织提取总RNA,反转录成cDNA,以正常小鼠睾丸组织cDNA作为待检组织(tester),以热激小鼠睾丸组织cDNA作为驱动组织(driver),
经过2轮杂交和抑制性PCR扩增,产物与T载体连接,经蓝白斑筛选,提取质粒,经EcoRI酶切鉴定插入片段并测序,由此构建了2种组织间差异表达基因的差减cDNA文库。用半定量RT-PCR方法,进一步验证
了该文库中差减出的基因基本上为差异表达的基因。对随机挑选其中的932个克隆测序,对有效测序的565个基因序列与GenBank数据库中发布的序列进行同源性比较,大部分片段都可以检索到同源序列。
结果显示,cPGES/p23等13个基因热激后表达量上调;septin2等120个基因热激后表达量下调。其中cPGES/p23为本研究中首次发现的小鼠生精过程中对热敏感的基因。 相似文献
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从石蜡包埋组织高效提取RNA的优化及Shh的RT-PCR检测 总被引：2，自引：0，他引：2
从石蜡包埋组织中提取高质量的RNA是对肿瘤实体组织进行分子生物学研究的重要方法之一．利用人的胃肠道肿瘤材料，通过蛋白酶K消化，经酚-氯仿、异戊醇抽提去蛋白及异丙醇沉淀，优化了1套从石蜡包埋组织中提取RNA的方法，提高了所提取RNA的质量和产量．所得RNA经电泳检测，并进行RT-PCR扩增Shh(sonic hedgehog)信号分子，结果良好．故认为此提取RNA的方法值得推广． 相似文献
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