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人Cu,Zn-SOD在酵母系统中的表达 总被引:5,自引:0,他引:5
甲醇酵母(Pichia pastoris)是一种理想的真核蛋白高水平表达系统。将人Cu,Zn-SOD基因克隆到酵母整合型质粒载体pPIC3.5K,经转化his4缺陷型酵母GS115,用MD培养基及PCR方法筛选阳性转化子,并用含G418的YPD培养基筛选多拷贝转化子,经甲醇诱导表达,SDS-PAGE和蛋白质印迹杂交结果证实了表达产物为重组的人Cu,Zn-SOD,经计算机扫描分析,表达量占酵母可溶性 相似文献
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将Cu,Zn-SOD与抗癌胚抗原(CEA)单链抗体基因(ScFvgene)融合,重组到含T7启动子的表达载体p ET-22b(+)中,构建表达质粒pETSOD-ScFv,并转化大肠杆菌BL21(ED3),进行了高效表达,表达物占菌体可溶性总蛋白的18%。SDS-PAGE和蛋白质印迹图谱显示表达物相对分子质量为41kD,与融合基因编码蛋白质的理论值相符。该蛋白质在磊肠杆菌中为分泌型表达,有利于纯化。RIA测定表明产物能特异性地与抗原CEA结合,邻苯三酚法测定也表明产物具有SOD酶的活性,该融合蛋白为分泌CEA肿瘤的靶向性治疗及放疗、化疗后的恢复提供新的途径。 相似文献
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