大鼠前列腺间质增生模型的建立

为建立前列腺间质增生的动物模型,将大鼠随机分为假手术组、去势组、去势 雄激素组、去势 雌激素组、去势 不同比例的雌/雄激素组(1∶50,1∶100,1∶200,1∶300),考察各实验组的前列腺指数、组织切片的形态学和平滑肌特异蛋白免疫组化染色的变化.结果表明与正常组比较,凡施用雌/雄激素组的前列腺指数均明显增高,以1∶100和1∶200组尤为明显.去势 不同比例雌/雄激素组较正常组的前列腺组织增生明显,而且间质中平滑肌细胞成分在雌/雄激素比例为1:100组明显增加.因此,用雌/雄激素协同作用诱导大鼠前列腺间质增生的最佳比例为1∶100.     

前列腺癌微小转移检测试剂盒

前列腺癌在欧美国家是最常见的男性恶性肿瘤，在与肿瘤相关的死亡率排行榜上仅次于肺癌，居第二位。随着饮食结构的改变，前列腺癌在我国的发病率有逐渐增高的趋势。目前对前列腺癌的检测手段有血清前列腺特异抗原(PSA)水平、直肠指诊、CT、经直肠B超、磁共振成像和骨扫描等，这些方法可检查出已明显形成转移灶的肿瘤，但对微转移患者却无能为力。     

丹参酮IIA与雷洛昔芬联合用药对大鼠前列腺增生防治作用的实验研究

良性前列腺增生(BPH)是引起老年男性排尿障碍的常见疾病.本研究在雌雄激素诱导大鼠前列腺增生模型基础上,探究丹参酮IIA与雷洛昔芬联合用药对大鼠前列腺增生的防治作用.结果表明,与模型组相比,丹参酮IIA与雷洛昔芬联合用药显著抑制大鼠前列腺体积增大,降低前列腺指数,同时减少前列腺上皮和间质细胞中雄激素受体(AR)和雌激素受体α(ERα)的表达;与单独用药组相比,联合用药的治疗作用显著优于单独用药.提示,在大鼠前列腺上皮和间质细胞中,丹参酮IIA与雷洛昔芬联合用药可能通过同时降低细胞中AR和ERα表达抑制细胞增殖.     

含有肌球蛋白重链启动子的p-EGFP1质粒的构建

从前列腺组织中提取总DNA，以其为模板经PCR扩增得到肌球蛋白启动子，将扩增片段和处理好的p—EGFP1载体相连，连接产物转入到大肠杆菌HB101中，经筛选得到连有myosin启动子的p—EGFP1重组质粒．用酶切和PCR的方法对重组质粒进行鉴定．成功构建的质粒可用于前列腺平滑肌细胞和成纤维细胞的分离，这将对于阐明前列腺基质增生的机理起到重要作用．     

TGFβ1介导雌二醇对前列腺间质细胞smoothelin表达的促进作用

研究了雌激素在促进前列腺基质细胞化过程中作用的分子机制.在前列腺基质细胞培养液中分别添加TGFβ1,雌二醇、雌二醇和ICI182.780、睾酮、睾酮和芳香化酶抑制剂、双氢睾酮、雌二醇和TGFβ1中和抗体;用半定量RT-PCR的方法检测基质细胞中平滑肌细胞特异蛋白smoothelin和TGFβ1 mRNA的表达水平;用ELISA测定基质细胞培养基中TGFβ1的浓度.结果显示TGFβ1可明显促进smoothelin的表达;雌二醇和睾酮能明显刺激TGFβ1基因和蛋白的表达水平,而雌激素受体抑制剂ICI182.780和芳香化酶抑制剂可分别抑制雌二醇和睾酮对TGFβ1表达的促进作用;双氢睾酮对TGFβ1基因的表达没有影响.TGFβ1中和抗体能抑制雌二醇对smoothelin的促表达作用.结果显示雌二醇可能通过诱导TGFβ1促进前列腺平滑肌细胞特异蛋白smoothelin的表达.     

酸苯酚萃取总RNA方法的改进

目前提取总ＲＮＡ普遍使用的是酸苯酚萃取法（或称硫氰酸胍法）．此法所提取的ＲＮＡ中存有少量基因组ＤＮＡ的污染．为了克服这一缺点,我们对酸苯酚提取ＲＮＡ的方法进行了改进．即先用酸苯酚萃取,然后用蛋白酶Ｋ消化,再次酸苯酚萃取．用改进的方法提取的ＲＮＡ无基因组ＤＮＡ的污染     

去势耐受前列腺癌中雌雄激素对芳香化酶表达的影响及芳香化酶启动子成分的改变

去势耐受前列腺癌(Castrate-resistance prostate cancer, CRPC)的发生是进展性及转移前列腺癌治疗中的主要障碍,其中性激素在CRPC发生及进展过程中发挥着重要作用.在本实验中发现,调节雌雄激素转换的关键酶—芳香化酶转录参与的主要启动子在CRPC细胞系中发生改变:雄激素依赖前列腺癌细胞系LNCaP中芳香化酶转录的主要驱动启动子为I.4,而在CRPC细胞系LNCaP abl,PC-3和22RV1中转变为启动子PII.此外,雄激素能够上调芳香化酶在CRPC细胞系中的表达,而雌激素对芳香化酶的表达没有明显影响.上述结果提示CRPC中芳香化酶的异常表达可能影响前列腺癌进程.     

实时定量PCR技术检测前列腺癌微小转移的研究

通过利用TaqMan定量PCR检测前列腺增生和前列腺癌患者外周血中前列腺特异抗原(PSA)和前列腺特异膜抗原(PSMA)的表达量,建立了一种通过检测患者外周血单个核细胞中前列腺特异基因表达水平检测前列腺癌微小转移的方法.实验结果表明,PSA在转移癌、局限癌和增生患者组中与GAPDH的相对表达量分别为(2.63×10-3±3.4×10-4),(2.6×10-4±3.9×10-5)和(2.6×10-5±4.5×10-6),各组间有显著性差异(p＜0.001);PSMA在各组间的相对表达量分别为(6.4×10-3±9.3×10-3),(5.0×10-4±8.3×10-5),(2.4×10-5±7.2×10-6),各组间亦存在着显著性差异(p＜0.001).因此用定量PCR技术检测外周血中PSA和PSMA的表达水平,可区分前列腺转移癌、局限癌和增生患者,该方法可用于前列腺癌的早期诊断.     

TAT—GFP—ERβ融合蛋白的原核表达与鉴定

从前列腺中提取总RNA,RT-PCR获得ERβ基因,将其联人pEGFP载体,得到重组质粒pEGFP-ERβ,再将上述质粒的GFP-ERβ片段亚克隆于pTAT-2.1质粒,形成pTAT-GFP-ERβ重组质粒.在BL21工程菌中IPTG诱导表达TAT-GFP-ERβ融合蛋白.用Western Blot鉴定纯化的融合蛋白的免疫原性.用纯化的蛋白转导事先转染ERE-Luc报道质粒的Hela细胞,用Luciferase Assay鉴定转导蛋白的生物学活性.证明TAT-GFP-ERβ蛋白具有完整的生物活性.     

免疫组化法探究前列腺癌进展过程中细胞表型特征

细胞角蛋白(CKs)是上皮细胞不同分化亚群的标志物,对了解前列腺癌发生发展具有重要意义.本研究采用免疫组化法分别鉴定雄激素依赖(LNCaP)/非依赖性(LNCaP abl)前列腺癌细胞系;正常、增生和不同Gleason评分人前列腺癌组织切片中CKs表型特征.结果显示,LNCaP abl细胞中CK14~+基底细胞及CK15~+和CK17~+中间态细胞的阳性率较LNCaP细胞显著升高.增生组织中CK14~+、CK15~+和CK17~+阳性率较正常组织显著增多;而前列腺癌组织中,随着Glesson评分的升高显示出CK8/18~+细胞数显著降低,CK14~+表达缺失CK15~+阳性率相对升高,差异具有统计学意义.提示CK15~+中间态细胞在前列腺癌进展过程中具有重要作用.