水稻ⅡB型拓扑异构酶OsSpo11基因的cDNA克隆、表达谱分析及其可变剪接的检测

 Spo11基因是减数分裂双链断裂（DSBs）与分裂重组的初始化基因,在基因组进化方面具有重要作用。通过改进的Nest-PCR方法,从水稻愈伤组织中克隆到了水稻DNA拓扑异构酶OsSpo11基因的cDNA片段。克隆测序与表达研究表明,OsSpo11基因是水稻ⅡB型拓扑异构酶A亚基基因,在水稻不同组织中具有低丰度表达、组织特异性、可诱导性以及前体RNA剪接的可变性等特点。可变剪接异构体的发现,使OsSpo11基因在DNA代谢、发育、遗传重组等过程中的生物学功能表现出一定的复杂性,其功能和生物学意义有待进一步研究。     

水稻ⅡB型拓扑异构酶OsSpo11基因的cDNA克隆、表达谱分析及其可变剪接的检测

Spo11基因是减数分裂双链断裂（DSBs）与分裂重组的初始化基因,在基因组进化方面具有重要作用。通过改进的Nest—PCR方法,从水稻愈伤组织中克隆到了水稻DNA拓扑异构酶 OsSpo11基因的cDNA片段。克隆测序与表达研究表明,OsSpo11基因是水稻ⅡB型拓扑异构酶A亚基基因,在水稻不同组织中具有低丰度表达、组织特异性、可诱导性以及前体RNA剪接的可变性等特点。可变剪接异构体的发现,使OsPo11基因在DNA代谢、发育、遗传重组等过程中的生物学功能表现出一定的复杂性,其功能和生物学意义有待进一步研究。     

重金属镉对8个水稻(Oryza sativa L.)品种(系)萌发和出芽生长的影响

为了探明不同水稻品种间抗镉能力差异及不同镉胁迫水平对水稻种子萌发和出芽生长的影响,对轻、中、重度镉胁迫下8个水稻品种(系)萌发和出芽生长间的相关性状指标进行收集,并通过聚类分析法进行分析评价.结果表明:不同水稻品种抗镉能力存在较大差异.轻度镉胁迫对水稻萌发的影响,更多的体现为对水稻种子活力的单抑制效应,该水平下的综合性状表现更符合相关性拟合曲线,适合用于抗镉品种的筛选.水稻出芽期间受镉胁迫影响最大的是转绿时间和根系生长.三个杂交水稻主要亲本(保持系岗46B、Ⅱ-32B和恢复系成恢3203)都属于高抗型,三个常规籼稻品种(桂朝2号、桂育7号及五山丝苗)都属于敏感型.     

不同水稻品种(系)的垩白差异及胚乳细胞学结构研究

调查了18个水稻品种(系)的垩白度、垩白粒率和垩白大小,并对米粒胚乳横断面上的胚乳细胞和淀粉粒进行了电镜扫描.结果表明,供试品种(系)的垩白粒率和垩白度存在显著差异,但垩白大小差异不显著,不同品种(系)在稻米胚乳细胞的形态结构和排列方式上有所不同,其横断面上淀粉粒的分布情况也有明显差异.不同品种(系)的垩白米之间,品种内垩白米与非垩白米之间,以及垩白米不同部位之间的淀粉粒形态具有差异.米粒横断面背腹径方向上长方柱状细胞群(细胞长度为宽度的两倍以上)与垩白发生有一定相关性,但不是垩白发生的决定性因素.淀粉粒在米粒横断面上分布情况与垩白发生有着更为密切的关系,淀粉粒分布越均匀越不易发生垩白,而如果淀粉粒分布不均匀,则使得其排列疏松并最终产生垩白.本文还对垩白发生的机理进行了探讨.     

籼稻姊妹染色单体粘着蛋白OsRad21-i基因的原核表达载体构建与表达

以杂交水稻汕优63的根组织cDNA为模板,采用引物设计引入酶切位点和RT-PCR方法,扩增出了籼稻姊妹染色单体粘着基因OsRad21-i (AY318757)开放阅读框(ORF),命名为Eqfr,两端分别带有BamHⅠ和SalⅠ限制性位点.然后克隆到pGEM-T载体,将重组克隆载体pGEM-T-Eqfr与表达载体pQE30分别同时进行BamHⅠ和SalⅠ双酶切,连接酶切后的Eqfr和pQE30,并转化DH5α感受态细胞,获得了DH5α[pQE30-Eqfr]重组克隆.再以其重组质粒转化M15[pREP-4]感受态细胞,筛选出M15[pQE30-Eqfr, pREP-4]重组克隆.通过诱导表达,检测到了相对分子质量约为116 000的重组蛋白表达,在诱导后的1～3 h里表达量较高,之后表达量开始下降.用实验证实了理论推测ORF的正确性,所获得的表达蛋白及其表达体系为下一步的蛋白质实验奠定了基础.     

重金属镉对8个水稻（Oriza sativa L.）品种（系）种子萌发的影响

为了探明不同品种水稻间抗镉能力差异及不同浓度镉胁迫对水稻种子萌发的影响,[方法]采用水培方法,对8个水稻品种轻,中,重度镉胁迫下种子萌发时期的相关性状指标进行收集,并通过聚类分析法对8个水稻品种的抗镉胁迫能力进行分析评价。[结果]表明：不同品种水稻其表型及生理机制各异,抗镉能力存在较大差异。轻度重金属镉胁迫对水稻种子萌发的影响,更多的体现为对水稻种子活力的单抑制效应。随着胁迫浓度的增大,水稻种子萌发受影响越大。中重度胁迫水稻的种子萌发敏感型品种生长表现为根芽尖脆弱易断,芽色不能及时转绿等现象。轻度重金属胁迫下的指标其综合性状表现更符合相关性拟合曲线。故选择轻度重金属胁迫下水稻的相对性状表现筛选重金属抗性品种,与实际环境情况最为相符合。聚类分析结果显示,三个杂交水稻主要亲本保持系亲本岗46B,保持系亲本Ⅱ-32B,和恢复系亲本成恢3203都属于高抗型。三个常规籼稻桂朝2号,桂育7号及五山丝苗都属于敏感型。本实验结果为培育重金属抗性品种提供了有价值的线索和材料。     

籼稻姊妹染色单体粘着蛋白OsRad21-i基因的原核表达载体构建与表达

 以杂交水稻汕优63的根组织cDNA为模板,采用引物设计引入酶切位点和RT-PCR方法,扩增出了籼稻姊妹染色单体粘着基因OsRad21-i (AY318757)开放阅读框（ORF）,命名为Eqfr,两端分别带有BamHⅠ和SalⅠ限制性位点。然后克隆到pGEM-T载体,将重组克隆载体pGEM-T-Eqfr与表达载体pQE30分别同时进行BamHⅠ和SalⅠ双酶切,连接酶切后的Eqfr和pQE30,并转化DH5α感受态细胞,获得了DH5α［pQE30-Eqfr］重组克隆。再以其重组质粒转化M15［pREP-4］感受态细胞,筛选出M15［pQE30-Eqfr, pREP-4］重组克隆。通过诱导表达,检测到了相对分子质量约为116 000的重组蛋白表达,在诱导后的1～3 h里表达量较高,之后表达量开始下降。用实验证实了理论推测ORF的正确性,所获得的表达蛋白及其表达体系为下一步的蛋白质实验奠定了基础。