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W 7-agarose是常用的细胞外CaM功能的拮抗剂,本实验采用荧光光谱法研究了水溶液中钙调素拮抗剂W 7-agarose与植物胞外钙调素的相互结合反应。W 7-agarose是一种将W 7-共价连接到颗粒型agarose(琼脂糖)的粒子。W 7-agarose颗粒较大且容易沉淀,静置5m in后,溶液中的荧光强度完全由游离的CaM产生。在溶液中加入W 7-agarose后,溶液中一部分CaM与其结合后沉降至荧光比色皿底部,导致溶液中CaM的荧光强度下降。由此可以确定溶液中游离CaM的浓度。根据公式lg{[Q]t(F0-F)/F0}=nlg{[Q]tF/F0} lgnK[B]t,从而计算出配位体系的结合常数和配比。研究表明:二者以摩尔比1∶1结合,其平衡常数为4.9×105。由此进一步计算了W 7-agarose对胞外钙调素的拮抗率,在拮抗剂W 7-agarose浓度达到15~20μmol/L时,拮抗率可达到90%以上,与文献报道的生物学体内实验结果一致,从分子水平上解释了W 7-agarose与CaM的结合作用。 相似文献
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Tb3+离子发光探针研究Ca2+,La3+和Al3+与拟南芥钙调素的竞争结合 总被引:2,自引:0,他引:2
利用Tb3 离子的发光, 研究了Tb3 与拟南芥钙调素 (CaM)结合的荧光光谱及荧光滴定曲线特点, 然后利用Tb3 4*CaM系统在221 nm直接激发和280 nm敏化激发的光谱变化研究了Ca2 , La3 和Al3 与拟南芥钙调素 (CaM) 的竞争结合作用. 结果表明: Tb3 , La3 与钙调素的竞争结合能力强于Ca2 , 而Tb3 的竞争结合力又大于La3 , Ca2 与钙调素的结合力远大于Al3 . 竞争实验的结果从分子水平上揭示了Tb3 , La3 和Al3 等金属离子生物效应可能的分子机制. 相似文献
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自一九七四年以来,我们分别在正定县三角村大队、永安公社和校内农场进行小麦营养诊断的实践和研究。四年来的工作,我们体会到小麦的营养化学诊断抓住了高产栽培管理上的关键——水肥管理,而且具有简便、快速,在生育期内能将测定结果及时运用于指导麦田管理, 相似文献
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利用生物素-CaM凝胶覆盖技术,在白芷悬浮培养细胞外检测一个分子量为21KD的钙调素结合蛋白(CaMbp),并用SephadexG-100凝胶过滤柱,CM-Sepharose阳离子交换柱层析将其纯化。 相似文献
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探讨以两种新荧光蛋白MiCy,mKo为传能对并应用供体光漂白法测量荧光共振能量转移(FRET)效率.首先通过基因工程方法表达纯化了这两种蛋白,并测量了荧光光谱及光漂白性质,表明MiCy极易光漂白而mKo抗光漂白.进一步以Ni-NTA-agarose为FRET模型,在Confocal上对MiCy进行光漂白时间常数的测量,并计算了FRET效率.结果表明MiCy-mKo传能对适合用供体光漂白法测量FRET效率,此传能对将在蛋白质相互作用研究中有广泛应用. 相似文献
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在一种金属离子[Ca2+ ]及两种金属离子[Ca2+ ,Mg2+ ]螯合剂缓冲体系中总[Ca2+ ]t 的计算工作基础上,进行了含有两种金属离子[Ca2+ ,Mg2+ ]——螯合剂缓冲体系中自由钙[Ca2+ ]的计算研究.特别是利用微机给出了简单计算公式,编制了计算程序;并给出部分常用数据.只要在所需pH 值、温度、[EDTA]t 或[EGTA]t 浓度条件下,根据实验要求,由[Ca2+ ]t 和[Mg2+ ]t 就可以求出自由[Ca2+ ]. 相似文献
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植物细胞外钙调素的稀土发光探针研究 总被引:10,自引:1,他引:9
从植物中提纯了细胞外钙调素(CaM),并利用NAD激酶激活作用及拮抗剂的抑制作用进行了CaM特性试验。利用稀土(Tb^3+)发光探针测得胞外CaM具有4个金属离子结合位点。敏化Tb^3+激发光谱结果证明其含有1个Tyr残基。胞外CaM(Yyr?能够向Tb3+传能并使Tb3+特征发光增强。根据Forster能量传递理论测得胞外CaM中Tyr→Ⅲ,Ⅳ位之间距离分别为1.104和1.056nm,它们均小 相似文献
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钙调素参与植物线粒体琥珀酸脱氢酶(SDH)活性调节的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
对纯化的玉米线粒体SDH进行CaM含量测定电泳分析,对NADK的激活及外源CaM对SDH活性的影响研究,结果表明:SDH中可能含CaM亚基,并且SDH活性可能受Ca(2+)·CaM调节. 相似文献