水稻转座子Pong特异性RNAi载体TPAS的构建和农杆菌介导的遗传转化条件的优化

为研究水稻转座子Pong的功能,构建了Pong的特异RNAi表达载体TPAS,并利用农杆菌介导法将这个载体转化到水稻的成熟胚愈伤组织,获得了PCR阳性的再生植株.同时通过对农杆菌侵染途径、侵染浓度和侵染时间等的研究,建立并优化了水稻的遗传转化程序,结果表明:在农杆菌侵染成熟胚愈伤组织的时间为3 min,共培养2～4 d...     

原核表达HIV-1抗原蛋白的ELISA活性检测

研究了HIV-1 gp120s和gp41在大肠杆菌中表达产物的抗原特异性.首先构建表达质粒p120s和pT41,并转化到BL21和M15中.宿主细胞经IPTG诱导表达重组蛋白,SDS-PAGE和Western blot表征分析蛋白产物.总蛋白中gp120s占17.9%,为可溶性表达;gp41占24.6%,为包涵体形式.亲和层析法检测蛋白纯度分别为63.1%和89%.酶联免疫吸附(ELISA)实验说明重组蛋白有良好的抗原特异性.     

顺序注射尿碘测定仪的研制及应用

研制了一种顺序注射尿碘分析仪,将顺序注射技术与催化动力学分析相结合,利用碘对砷-铈氧化还原反应的催化作用,建立了顺序注射尿碘测定方法.采用流速和推吸可控的程控注射器及16孔程控选择阀,实现了顺序注射进样和停留稳态测量.恒温流动池使碘催化的砷-铈反应可以在恒温状态下进行.应用自行设计的微机接口电路和尿碘测定的应用软件,控制反应温度(32.0±0.1)℃,流动配送时间45 s,停流稳定时间60 s,停流检测时间20 s,进样量400 μL.本方法线性范围为15～600 μg/L,检出限为5.01 μg/L(n=11),回收率为94.1%～105.1%.对国家标准参考物质(GBW09109和 GBW09110)的测定结果在给定的标准值范围内.应用本方法检测尿碘并与国家卫生行业标准方法(WS/ T107-2006)进行比较,测定结果无显著性差异(P>0.05).     

FITC标记重组灵芝免疫调节蛋白(rLz-8)在NB4细胞中的动态定位

实验发现, 重组灵芝免疫调节蛋白(rLz-8)可直接杀伤人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4. 利用异硫氰酸荧光素(FITC)标记rLz-8, 其相关的活性实验结果和晶体结构分析都表明, FITC没有影响rLz-8已知生物学功能. 通过激光共聚焦显微镜观察FITC-rLz-8在NB4细胞内的动态过程发现, FITC-rLz-8可识别细胞膜上的受体, 并可进入细胞质, 并最终富集在细胞核区域内. Annexin V-FITC双染检测结果显示, rLz-8对NB4细胞杀伤作用的可能机制是对NB4细胞凋亡的诱导作用, 在一定浓度范围内, 剂量与凋亡诱导率成正相关. 因此rLz-8能够诱导肿瘤细胞NB4发生凋亡的亚细胞学机制可定位在细胞核上.     

水稻转座子Pong RNAi载体的构建和农杆菌介导的遗传转化

为探讨水稻转座子Pong的功能及其对水稻基因组甲基化的影响,构建了水稻转座子Pong的RNAi表达载体TPAI和TPAⅡ,并利用这两个载体采用农杆菌介导法转化水稻(品种松前)的成熟胚愈伤组织,获得PCR结果阳性的再生植株.同时通过不同的农杆菌侵染途径、侵染浓度和侵染时间等,建立并优化了水稻的遗传转化程序.结果表明:农杆...     

不同株型大豆形态与花荚脱落率的研究

特异株型大豆与普通大豆比较,茎、叶、花的形态有着较大的区别,表现为:茎的中下部为圆形,上部为扁形或棱形;叶片的着生状态既有对生、互生也有轮生,而且多数叶片生长于茎的中上部,叶柄较短;花集中生长于茎的顶端呈现一大荚簇.特异株型结构使大豆在生殖生长时期的源库供应关系较为合理,降低了大豆花荚脱落率.     

无筛选标记基因高油酸花生高效载体的构建

提高油酸的相对含量,增加油酸 /亚油酸(O/ L)的比值,已成为目前油料作物品质改良的重要内容.ahFAD2B是编码花生微粒体ω 6-脂肪酸脱氢酶的主要基因,根据双链RNA介导的基因沉默原理,设计和构建了可以抑制花生种子油酸脱氢酶基因ahFAD2B表达的载体,从而提高了油酸的含量,改善了花生油脂肪酸的组成.进一步将该构建组装到一个双右侧边界(DRB)的共转化载体中,用该载体来转化花生,以期从转基因后代中筛选无抗生素标记基因的高油酸花生材料.     

猪毛菜液泡膜SsNHX1基因的克隆及功能验证

为研究猪毛菜液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白的功能,从猪毛菜中将该基因克隆出来并在酵母中获得了表达.结果表明,整合外源SsNHX1基因的酵母在含有0.5mol/L NaCl的培养基中的生长速率要比对照高,菌落的直径比对照明显大.证明猪毛菜SsNHX1基因能够有效地提高酵母转化子的耐盐能力.