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抗砷质粒pSDR941的构建及其在专性自养极端嗜酸性氧化硫硫杆菌中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
将具有广泛寄主范围的IncQ质粒pJRD215的Kmr基因片段删掉,置换进大肠杆菌抗砷质粒pUM3上的抗砷基因及P1启动子片段,构建成新的抗砷质粒pSDR941,为12.4kb,通过接合的方式将其转移到氧化硫硫杆菌中并获得了表达,与对照菌相比,含质粒pSDR941的氧化硫硫杆菌的抗砷水平从15mmol/L提高到30mmol/L. 相似文献
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氧化亚铁硫杆菌质粒pTf—52限制图谱和嵌合质粒pSDF—1的构建 总被引:2,自引:0,他引:2
从一株氧化亚铁硫杆菌(Thiobacillus ferrooxidans)中分离到一个分子量为4.5×10~6Md 的质粒 pTf—52,用 Pst Ⅰ、BglⅡ、Kpn Ⅰ酶切此质粒,进行限制性酶切分析,作出了 pTf—52的限制图谱;并将 pTf—52插入到 pBR325的 Pst Ⅰ位点,体外重组,转化 E.coli HB101,构建成一个能够在 E.coli 中进行复制的嵌合质柱 pSDF—1(Tc~rCm~rAp~s),分子量为8.2×10~6Md。经限制性酶切分析,确证 pSDF—1是由 pBR325和 pTf—52重组成的,并确定了这两种质粒在 pSDF—1中的连接方向。 相似文献
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以光合细菌圆球状红杆菌Rhodobactersphaeroiodes的rbcL-rbcS基因为探针,与多能硫杆菌(Thiobacillusversutus)染色体DNA酶切谱带进行Southern杂交,检测到了rbcL-rbcS基因的同源序列,又以pUC9为载体,克隆了T.versutus染色体DNAPstI酶切片段,构建成T.versutus基因文库,并从这个基因文库中筛选到了含有RubisCO基因的重组质粒,将其命名为pSDLS-10,进一步对pSDLS-10进行了限制性酶切分析,作出了pSDLS-10限制性内切酶图谱 相似文献
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将3.4kb的多能硫杆菌1,-5二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶基因片估亚克隆到启动子探测质粒载体pKL6的HindⅢ位点,该基因片段能够启动pKL6的lac基因的表达,说明3.4kb的rbcL-rbcS基因带有自己的启动子。 相似文献
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以λEMBL_3噬菌体 DNA作为载体,用BamHI/EcoRI双酶切后,与Sau3AI部分酶切的氧化亚铁硫杆菌Tf-55染色体10~23Kb DNA片段连接,体外包装成重组噬菌体,所得重组子为6×10~4Pfu(噬菌斑形成单位)达到了建库要求的理论值。并用酶切分析及分子杂交的方法对该库进行了验证。 相似文献
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将3.4kb的多能硫杆菌1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶基因(rbcL-rbcS)片段亚克隆到启动子探测质粒载体pKL6的HindⅢ位点,该基因片段能够启动pKL6的lac基因的表达,说明3.4kb的rbcL-rbcS基因带有自己的启动子. 相似文献
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将多能硫杆菌(Thiobacilusversutus)RubisCO基因从两个方向亚克隆到pBR322和pKK223-3载体上,通过酶切的方法对各种质粒的插入方向进行了确证.并进一步对这两种插入方向的质粒在大肠杆菌(Escherichiacoli)中的表达情况进行了酶活性的测定,该基因片段在pKK223-3载体的tac启动子的启动下,表达活性比lac启动子以及pBR322载体上的P1和P2启动子高. 相似文献
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