邻苯二胺—过氧化氢—辣根过氧化物酶酶联免疫示差脉冲伏安法测定人血清…

建立了邻苯二胺（ＯＰＤ）－Ｈ２Ｏ２－辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）酶联示差脉冲伏安分析体系并用于测定人血清中类风湿因子（ＲＦ），ＨＲＰ催化Ｈ２Ｏ２氧化ＯＰＤ所形成麦催化产物在ＰＨ２．０磷酸盐－枸椽酸缓冲溶液中于－０．１８Ｖ左右产生－灵敏示差脉冲伏安峰，在ＲＦ浓度在１．２５－２０．０Ｕ／ｍＬ之间与峰电流呈线性关系，应用此峰检测人血清ＲＦ的检测限低至０．２８Ｕ／ｍＬ。该法较相同条件下ＥＬＩＳＡ以光度测定法的     

邻苯二胺-过氧化氢-辣根过氧化物酶酶联免疫示差脉冲伏安法测定人血清类风湿因子抗体

建立了邻苯二胺（ＯＰＤ）－Ｈ２Ｏ２－辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）酶联示差脉冲伏安分析体系并用于测定人血清中类风湿因子（ＲＦ），ＨＲＰ催化Ｈ２Ｏ２氧化ＯＰＤ所形成酶催化产物在ｐＨ２．０磷酸盐－枸橼酸缓冲溶液中于－０．１８ Ｖ左右产生一灵敏示差脉冲伏安峰，ＲＦ浓度在１．２５～２０．０ Ｕ／ｍＬ之间与峰电流呈线性关系，应用此峰检测人血清ＲＦ的检测限低至 ０．２８Ｕ／ｍＬ。该法较相同条件下ＥＬＩＳＡ显色光度测定法的灵敏度增加５倍，且受干扰较少。     

胶体金纳米粒子及其蛋白标记物在电场中的泳动行为研究

采用柠檬酸钠还原法制备了3种不同粒径的胶体金纳米粒子,分别用于与蛋白质分子标记。同时以琼脂糖凝胶为支持介质,观察其在电场条件下的泳动行为特征,并进行对比研究。结果表明,在特定电场条件下,胶体金纳米粒子愈小,其泳动速度愈快,但呈现弥散状分布特征。当胶体金颗粒包敷蛋白分子后即可得到很好的分离,且随标记的蛋白质分子不同而存在很大程度的差异,其在琼脂糖凝胶中的泳动速度依次为BSA,SPA,rhCaM和GAHIgG-γ球蛋白分子。该工作为研究特定生物结构分离、配体分子检测及微器件制作方面提供了新的思路。     

电位控制辣根过氧化酶在金电极上的组装

以辣根过氧化酶(HRP)为模型蛋白质, 研究了蛋白分子的电位控制组装. 采用氨基乙硫醇(AET)在金电极上自组装单分子层(SAMs), 通过改变溶液的酸碱度调节HRP所带的电荷, 利用控制电位方法在SAMs上组装HRP. 借助于酶与底物作用后光密度(OD)的变化研究了不同体系中HRP组装量随控制电位变化的规律, 并用X射线光电子能谱(XPS)和原子力显微镜(AFM)等手段表征了电位控制HRP修饰电极. 结果表明, 控制电位不会改变HRP的活性, 酶-底物作用后显色反应的光密度高低可评价组装HRP分子的相对含量. 在恒电位控制模式下, 流经电极的总电荷接近零时HRP的组装量较多. 该研究将对生物分子的控制组装和生物体内带电器件的设计具有较重要的意义, 并为生物纳米器件的研制提供技术基础.