鼠重组腺病毒介导的骨形成蛋白-9转染大鼠牙囊干细胞的实验研究

目的：探讨鼠重组腺病毒介导的骨形成蛋白9基因转染大鼠牙囊干细胞的可行性及其转染后的成骨作用,以获得可用于牙周骨组织再生工程的基因修饰的种子细胞。方法：取大鼠下颌骨,解剖显微镜下体外分离培养纯化鉴定牙囊干细胞,腺病毒介导的骨形成蛋白9基因转染第三代牙囊干细胞,并设立空白对照组,绿色荧光病毒组（GFP组）。通过观察细胞形态及生长曲线变化,荧光显微镜及RT—PCR检测转染后骨形成蛋白9基因mRNA的表达,碱性磷酸酶及钙茜素红染色测定转染后牙囊干细胞的成骨活性。结果：与未转染对照组比较,转染组细胞转染2周后形成钙化结节,停滞期延长,数量轻度下降,倍增时间延长。牙囊干细胞转染骨形成蛋白9基因后12h后即有荧光表达,转染3,6,9,12d后骨形成蛋白9mRNA均呈阳性表达且逐渐增强,未转染对照组呈阴性。转染组碱性磷酸酶活性随转染时间的延长呈升高趋势,ALP染色及茜素红钙结节染色为阳性：未转染对照组碱性磷酸酶染色及钙茜素红染色均呈弱阳性表达,转染组显著高于未转染组。结论：鼠重组腺病毒介导的RBMP-9基因可以成功地转染大鼠牙囊干细胞,转染后牙囊干细胞高表达骨形成蛋白9,且具有明显的成骨作用。     

阻断ERK1／2蛋白激酶可促进BMP9诱导的C3H10T1／2细胞成骨分化

目的：初步分析丝裂原活化蛋白激酶家族成员ERKl／2在BMP9诱导间充质干细胞成骨分化中的作用及可能机制。方法：BMP9重组病毒感染巳H10T1／2细胞,Westemblot检测ERKl／2激酶的磷酸化。ERKl／2的特异性抑制剂PD98059阻断ERKl／2活性,细胞化学染色和活定量检测碱性磷酸酶（AlkalinePhosphatase,ALP）的表达情况;Westernblot检测骨桥蛋白（Osteopontin,OPN）表达,茜素红染色检测钙盐沉积情;荧光素酶报告基因实验检测srn日d经典途径的变化。RNA干扰抑制ERK1／2表达,分析其对-于BMP9诱导的C3H10T1／2细胞ALP活性和钙沉积的影响。结果：BMP9可以促进ERK1／2激酶的磷酸化;ERK1／2抑制剂PD98059可增强由BMP9诱导的c3H10T1／2细胞早期和晚期成骨化,并促进由BMP9诱导的Smad经典途径的活化;RNA干扰导致ERK1／2基因沉默同样也可促进BMP9诱导的QHIOT1／2细胞成骨分化。结：BMP9可以促进ERKI／2蛋白激酶的活化,而阻断ERK1／2蛋白激酶可进一步增强BMP9诱导的GH10T1／2细胞成骨分化。腺性况盐分论     

双氢青蒿素对骨肉瘤细胞143B影响的研究

目的：研究双氢青蒿素（Dihydroatemisinine,DHA）对人骨肉瘤细胞143B的影响及所导致的形态学变化。方法：采用人骨肉瘤143B细胞株,通过设置对照组和低浓度、中浓度、高浓度的DHA组,H．E染色观察Trandwell小室穿梭能力;划痕愈合实验观察迁移能力;Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡;MTT法检测细胞增殖抑制能力。结果：DHA表现出明显地抑制人骨肉瘤143B细胞的迁移、增殖以及促进凋亡（P〈0．05）,且伴随浓度的递增和时间的延长,抑制作用更明显。结论：DHA具有较强的抗入骨肉瘤作用,其机制可能与DHA诱导骨肉瘤细胞凋亡,并抑制其增殖有关。