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目的建立可靠的临床血清(浆)循环miRNAs定量技术。方法常规收集血清(浆)标本,mirVana PARIS试剂盒法抽提血清(浆)总RNA,采用DNaseI消化总RNA提取液,以miRNAs特异性茎-环引物引导反转录,通过TaqMan实时荧光定量PCR对U6及靶miRNAs进行检测。结果10份新鲜血浆总RNA浓度介于3.5～35.4ng/μl之间。对常规收集的400μl临床血清标本中U6、miR-16、miR-224均能实现特异扩增及定量,相应的平均Ct值约为30、25及32。6份不同留置时间血清标本总RNA浓度分别10.24和4.46ng/μl,定量PCR结果显示其中相应miR-16和miR-224的丰度却相对稳定。结论血清(浆)总RNA抽提及循环miRNAs定量切实可行。 相似文献
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