一种新颖的测定和分析羟自由基氧化损伤RNA及其分子机理的化学发光体系

近年来，羟自由基（^.OH)对DNA氧化损伤已受到广泛关注，但是很少研究^.OH对RNA的氧化损伤。其实，RNA与DNA一样，也是核酸的两大组分之一，也有许多重要功能。所以^.OH攻击RNA也会引起重后果，会造成细胞功能衰退甚至细胞死亡等。为此，我们建立了Vit.C-CuSO4-Phen-H2O2-PNA这一产生和测定^.OH氧化损伤RNA的化学发光体系，以便加强^.OH氧化损伤RNA的研究。通过对本体系测定条件的研究，得出了本体系最佳组方是：Vit.C,CuSO4,Phen,H2O2和RNA，浓度分别为350μmol/L,55μmol/L,350μmol/L,0.2mol/L和20μg/mL,体系pH为5．5，体系终体积为1mL。随后，利用本体系检测了槲皮素，咖啡酸，黄芩甙和芦丁抗^.OH氧化损伤RNA的作用，发现这四种抗氧化剂均能有效抑制^.OH氧化损伤RNA的分子机理，结果发现，^.OH清除剂硫脲几乎抑制全部发光，推测是因硫脲清除了引发剂^.OH所致；O^-.2清除剂SOD只能抑制小部分发光；^1O2清除剂叠氮化钠和苯甲酸都能抑制绝大部分发光。这些事实提示，^.OH是RNA氧化损伤的引发剂；O^-.2只是导致RNA氧化损伤的次要因素，^1O2才是导致RNA氧化损伤的最主要因素。     

两种芳香植物非挥发性组分抗氧化和对DNA损伤的保护作用

采用6种化学发光体系和两种比色体系研究了芳香植物罗勒和香柠檬的非挥发性组分(简称罗勒、香柠檬)直接清除活性氧、活性氮和对^.OH引起的DNA损伤的保护作用。结果表明,罗勒和香柠檬不仅能直接清除O2,而且可抑制黄嘌呤氧化酶的活性从而减少O2的产生。罗勒和香柠檬也能有效清除^.OH、H2O2、ONOO^.和DPPH^.,两者相比,香柠檬除对^.OH的清除作用弱于罗勒外,清除以上各种自由基的能力均强于罗勒。结果还显示,罗勒和香柠檬都能抑制脂质过氧化,明显地抑制和延缓DNA损伤,起到预防型抗氧化剂和断链型抗氧化剂的双重作用。这些结果表明,罗勒和香柠檬的非挥发性组分是有效的、多功能的天然抗氧化剂和自由基清除剂。     

一种新的测量单线态氧的化学发光体系

通过试验,建立了以磺化铝酞菁(Alpcs)-海萤萤光素类似物(CLA)经He-Ne激光照射产生并可检测单线态氧的化学发光体系,该体系灵敏、简便、快速、实用.     

快速检测甲胎蛋白的免疫层析试条的研制

研制了可简便、快速检出原发性肝癌标志物－－人血清中甲胎蛋白（AFP）的免疫层析试条。为此，研究了用国产试剂和材料制备胶体金、用此胶体金标记抗AFP单抗的影响因素以及抗AFP抗体固化条件、抗AFP抗体与其AFP结合能力等。结果表明，自制国产胶体金质量不亚于进口商品；金标单抗和固化抗体活性稳定，能分别显示出结合AFP分子不同表位的特异性。所得检测试条的检出速度在5至20min内，检测阳性阈值定为20ng AFP/mL血清。     

雷震子护康胶囊制剂抗氧化和对DNA损伤保护作用研究

雷震子护康胶囊以低聚原花青素、灵芝多糖、绞股蓝总皂甙及一定量的维生素C等为主要成分而制成，有多种保健功能。为研究该复方制剂的抗氧化作用，采用七种化学发光体系和一种比色体系研究了雷震子直接清除活性氧、活性氮和对^.OH引起的DNA损伤的保护作用。结果表明雷震子能有效清除O2^-.、^.OH、H2O2、ONOO^-和全血嗜中性白细胞“呼吸爆发”产生的活性氧，抑制脂质过氧化，保护DNA免受^.OH的氧化损伤。这些结果提示，雷震子是一种有效的抗氧化复方制剂，其强烈的抗氧化活性可能是其保健功能的重要药理基础之一。     

香叶天竺葵叶非精油组分清除自由基、抗氧化作用

活性氧与许多疾病的发生和发展密切相关,与食品的氧化也息息相关。所以筛选天然抗氧化剂显得非常重要。因此,分别采用水、乙醇和乙酸乙酯提取法从提取精油后的残渣中提取香叶天竺葵叶非精油有效组分,并分别采用超氧阴离子自由基(O2-·),羟自由基(·OH),过氧亚硝基(ONOO-)和.OH氧化损伤DNA的四种化学发光体系和二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)和脂质过氧化两种比色体系检测香叶天竺葵叶非精油组分清除多种自由基、活性氧的能力以及对DNA的保护作用。结果表明,香叶天竺葵叶非精油组分的3种不同提取物均能有效地清除O2-·、·OH、DPPH·和ONOO-,减轻或消除·OH对DNA的氧化损伤,抑制脂质过氧化,是一种有效的、多功能的天然抗氧化剂和自由基清除剂。由于非精油组分是从制取精油组分后的残渣中提取的,提取装置和工艺也非常简单,故本研究不仅为香叶天竺葵种植效益的提高和综合利用提供了可能,也为天然香料加工后废弃物的开发研究提供了资料,对经济环境保护和资源的再利用也有借鉴意义。目前国内外对芳香植物的研究与开发主要聚焦于精油组分,而研究表明,更多的抗氧化物质是存在于非精油组分中,由于非精油组分是从制取精油组分后的残渣中提取的,并且提取装置和工艺简单,是值得进一步开发利用的天然产物。     

天然黄酮类化合物清除DPPH·的构效关系

应用DPPH^＊分光光度测定法研究了11种高纯度的天然黄酮类化合物清除二苯代苦味肼基自由基（DPPH^＊）的构效关系。结果表明,这11种天然黄酮类化合物都能有效地清除DPPH^＊,其清除DPPH^＊作用大小顺序依次为：槲皮素〉泽漆新苷〉儿茶素〉金丝桃苷〉芸香苷〉山奈素〉桑色素〉异槲皮苷〉黄芩苷〉石吊兰素〉金雀异黄素。发现这11种天然黄酮类化合物有如下构效关系：1．B环上和／或A环上具有邻位羟基可大大增强清除DPPH^＊作用;2．B环上4’位羟基和A环上6位羟基清除DPPH^＊的活性都很强;3．异黄酮清除DPPH^＊的活性弱于相应的黄酮;4．黄酮醇清除DPPH^＊的活性强于相应的双氢黄酮醇,提示C环具有C2-C3双键结构可增强清除DPPH^＊作用;5．黄酮类化合物对DPPH^＊的清除能力与其酚羟基位置密切相关;6．C环3位上羟基被糖基化时,其清除DPPH^＊的作用减弱。所得结果为进一步开发利用黄酮类化合物提供了理论依据。     

褪黑素清除活性氧作用的研究

采用多种分析体系检测了褪黑素清除活性氧的作用，结果表明，褪黑素能有效地清除包括２、Ｏ２、Ｈ２Ｏ２在内的多种活性氧，能显著地抑制ＯＨ对ＤＮＡ的损伤，是一种有效的抗氧化剂。