扩散序谱(DOSY)实验测定缓冲体系中蛋白质表观分子量

液体核磁共振扩散序谱（DOSY）可以通过测定溶质分子的自扩散系数（D_t）来研究该分子在溶液中的表观分子量（M）.D_t与测试体系和分子本身性质相关，蛋白质体系较为复杂，从而增加了蛋白质自扩散系数（D_t-protein）测定的难度.本文以3-（三甲基硅基）丙磺酸钠（DSS）为内标，以蛋白质分子与DSS自扩散系数的比值（D_r）来表征蛋白质分子在溶液中的表观分子量（M_protein），该方法降低了缓冲体系对M_protein的影响，使得M_protein主要由分子本身的性质决定.在此基础上，测定了不同分子量蛋白质分子相对于DSS的D_r，拟合得到了D_r与M_protein的相关关系：lgM_protein =-2.6488 lgD_r-0.7863，相关系数（R²）为0.997.最后测定了通过大肠杆菌表达纯化得到的SARS冠状病毒主蛋白酶C端结构域（M^pro-C）分子相对于DSS的D_r，并计算出与文献结果一致的M_protein，进一步验证了拟合公式的准确性和实用性.