一种简易的脑片图像的半自动区域划分及细胞计数方法

脑科学研究往往需要对实验动物不同脑区的分子表达、细胞数目及神经网络连接模式进行量化和比较分析,然而目前缺乏简便易行的规模化的脑区划分方法.本文基于Paxinos和Franklin的第二版小鼠图谱以及Photoshop和ImageJ等图像处理软件,发展了一种简易的脑片图像的半自动区域划分及细胞计数方法.首先,基于小鼠脑图谱可获得脑区划分所需的标准模版;然后,利用Photoshop软件对标准模版进行变形矫正,可实现小鼠脑切片图像的快速规模化半自动配准及区域分割;最后,利用ImageJ可实现对配准及分区后的脑片图像不同区域的半自动神经细胞计数和分析.此方法适用于脑片免疫组织化学分析、神经元分布模式检测和神经环路标记等研究,其操作简便、易于获取、并且不依赖于其他昂贵的商业化神经图像分析软件,能为条件有限的科研工作者提供极大便利.     

利用VSV标记具有特定投射的特异类型神经元的精细结构

神经元是构成神经系统的基本单位之一，对其精细形态结构的研究是了解神经网络构筑和信息处理方式的基础，然而目前缺乏能够标记具有特定投射特征的特异类型神经元精细结构的有效方法.在糖蛋白基因缺失的水泡性口炎病毒（VSV）毒株基础上突变其核蛋白，我们获得了重组病毒VSV-△G-NR7A-EGFP，并发现该病毒在一定窗口期内可实现神经元形态的快速高亮度标记；我们进一步在此基础上构建了VSV-△G-EnvA-NR7A-EGFP病毒，并基于特定的转基因动物及辅助病毒rAAV-EF1α-Dio-Bfp-Tva，通过控制注射位点，分别实现了有NAc-LH投射特异性的D2R神经元和VTA-NAc投射特异性的多巴胺神经元的标记，展示了一种可用于稀疏、高亮地标记具有特定投射特征的特异类型神经元精细结构的新方法.