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表达猪瘟病毒E2基因和gfp报道基因的伪狂犬病病毒双基因转移载体的构建 总被引:5,自引:0,他引:5
将以PRVgG为启动子,SV40plyA为加尾信号的CSFV E2表达盒克隆于包含伪狂犬病病毒(PRV)tk基因和gH基因片段的重组质粒pTK2.5,替换掉tk基因的SalⅠ与XhoⅠ酶切位点之间的序列,构建了携带CSF E2基因的转移载体pTKE2。免疫荧光检测证实,转染BHK21细胞pTKE2在感染PRV的情况下,能表达E2蛋白,采用特异性引物PCR方法扩增gfp表达盒,对酶切位点进行改造,将其克隆到pTKE2的SalⅠ位点,构建了利用PRV gG启动子和HCMV IE启动子分别控制E2基因和gfp基因表达,两基因取向相反的双基因转移载体pTKE2.EFP.将双基因转移载体pTKE2.GFP转染BHK21细胞中,12h后在荧光显微镜下观察到呈绿色荧光的GFP表达,表达的GFP不引起细胞毒性。 相似文献
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