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本文介绍了在盘电泳聚丙烯酰胺凝胶上直接显示蛋白酶酶谱的方法,比通常的凝胶板重合到底物平板进行酶反应、显示的方法灵敏、方便.基本原理与操作步骤是将电泳后的聚丙烯酰胺盘电泳凝胶包上一层酪蛋白为底物,然后在饱和湿度与43℃条件中进行酶反应2小时,再染色显示未水解的酪蛋白背景,从而将透明的酶带区域衬托出来. 相似文献
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本法是在Ronald C.Roberts(1980)酶谱方法的基础上发展的,先在盘电泳凝胶上分离样品,再在载玻片琼脂糖平板上显示酶谱.我们用此方法来显示枯草杆菌商品酶粉的蛋白酶酶谱.蛋白酶样品经离心、透析后,先作盘电泳分离,电泳毕凝胶直接(或先浸在适当缓冲液中改变凝胶pH)与含酪素的琼脂糖平板贴在一起保温,使凝胶中的蛋白酶水解酪素,平板经固定、染色、脱色处理后,酪素未水解部分被染成蓝色背景,把无色的水解区域作为酶带衬托出来.还与在电泳凝胶上直接显示蛋白酶酶谱的方法作了比较.此外,以贴印法显示的各种酶谱,也存在着酶反应pH与电泳凝胶pH不一致的共同问题,对已有的改变凝胶pH的方法作了较为详细的检查,发现有的不能达到预期的结果,对此提出了相应的措施. 相似文献
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