SMS沉默对HepG2细胞炎症和CD14表达的影响

肝细胞的炎性损伤与全身性炎症引起的多器官功能障碍的发生相关,LPS可致全身性炎症,在炎症发生过程中,CD14是LPS的膜受体,可通过激活NF-κB诱导炎症相关因子的表达,CD14主要分布于细胞膜脂筏部位,脂筏是由鞘磷脂(SM)和胆固醇相互锚定,并与相关蛋白质组成的一种微空间结构,因此降低SM的合成,会降低SM在脂筏部位的含量,进而改变脂筏结构及CD14在脂筏部位的分布,最终影响炎症的发生。本研究利用干扰载体pSUPER-SMS沉默HepG2细胞鞘磷脂合酶(SMS)的表达,并检测SM在脂筏部位的含量及CD14和TNF-ɑ的表达,结果显示SMS1和SMS2的mRNA水平表达和酶活都有显著下降(P<0.001,n=3),SM在脂筏部位含量和CD14的表达均有显著降低(P<0.001,n=3),导致LPS所致HepG2细胞TNF-ɑmRNA水平的表达下降。可见SMS可通过改变CD14在脂筏部位的含量,最终影响和炎症发生相关分子TNF-ɑ的表达。     

D609增强HT-29细胞对辛伐他汀的敏感性

为了探讨D609能否提高HT-29细胞对辛伐他汀的敏感性及其可能的机制,利用不同浓度的辛伐他汀处理人结肠癌细胞(HT-29)24h,利用MTT法测定并计算出IC50。随后根据上述浓度将HT-29细胞随机分为四组:对照组、D609组、辛伐他汀组和D609+辛伐他汀组,加药处理24h后,采用MTT法检测D609和辛伐他汀对HT-29细胞增殖的影响,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹(WB)检测各组RIP140、SMS1、SMS2、BCL-2和BAX的表达。MTT实验结果显示,辛伐他汀可明显抑制HT-29细胞生长,且呈剂量依赖效应,其IC50为:67.98μmol·L-1,而辛伐他汀和D609联用可明显增强辛伐他汀对HT-29的生长抑制作用(P<0.05,n=3)。qRT-PCR和WB实验结果表明D609和辛伐他汀处理均上调了RIP140及BAX的表达,但降低了SMS1、SMS2、BCL-2的表达(P<0.05,n=3),而两者联用可显著增强这些改变(P<0.05,n=3),即D609可提高HT29细胞对辛伐他汀的敏感性,其机制可能与D609通过抑制SMS的活性和增加RIP140的表达有关。     

脂多糖对小鼠肝脏鞘磷脂合酶2表达的影响

LPS在细菌性感染所致的全身性炎症反应中具有重要的作用,而鞘磷脂(SM)参与了炎症反应的发生。催化SM从头合成的关键酶是SMS1和SMS2,其中SMS2和炎症反应最为密切。目前,由LPS所致的小鼠全身性炎症反应中,在小鼠肝脏部位SMS2的表达情况未见报道。为了阐明这一情况,本研究利用10mg/kg的LPS处理BABC/L小鼠18h,取小鼠肝脏进行HE染色,并提总RNA和总蛋白,分别利用实时荧光定量PCR和Western blot研究SMS2在mRNA和蛋白水平的表达情况,并利用薄层层析(TLC)测定对其酶活的影响。研究发现,和对照组相比,实验组SMS2的mRNA和蛋白水平均有显著增加(P<0.05,n=6),分别增加了116%和65.8%,而在酶活水平亦有非常显著增加(P<0.001,n=6),增加了64.3%。由此可见SMS2在LPS所致的炎症反应中起到重要作用,其酶活增加是LPS所致炎症反应所必要的,这将对炎症的治疗提供新的靶点,为新的抗炎药物的开发提供理论依据。更多还原