池蝶蚌金属硫蛋白基因的原核表达及活性分析

筛选池蝶蚌性腺转录组并运用RT-PCR方法扩增池蝶蚌金属硫蛋白(metallothionein,MT)ORF框序列。该序列有216个碱基组成,编码71个氨基酸,其中半胱氨酸含量丰富,富含金属硫蛋白典型的Cys-X(1-3)-Cys结构。多序列比对表明,池蝶蚌MT蛋白序列和其他物种MT序列有很高的同源性,与三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)MT蛋白具有100%的同源性。将该ORF框片段导入原核表达载体pET-32a上,在IPTG诱导下成功在E.coli BL21(DE3)中融合表达。SDS-PAGE分析表明,融合蛋白大小约为27kDa,在25℃,终浓度为1mM IPTG诱导4h表达量最高,重组蛋白主要存在上清液中,纯化并获得了重组蛋白。细胞增殖实验表明,纯化的MT融合蛋白有生物活性并能有效地减轻宫颈癌Hela细胞的氧化胁迫效应。     

乌龟形态性状对体重的影响效果

选择I龄乌龟291只,测定背甲长、背甲宽、甲桥长、腹甲长、腹甲宽、体高和体重共7个性状,采用相关分析和通径分析方法,计算了以形态性状为自变量对体重做依变量的相关系数、通径系数、决定系数及相关指数,定量地分析了形态性状对体重的影响效果。结果表明,乌龟7个形态性状与体重的相关系数达到极显著水平(p﹤0.01);通径分析揭示了多元分析中多个自变量与依变量的真实关系,背甲长、背甲宽、体高和腹甲长对体重的通径系数达到显著水平,它们是影响体重的重要指标,其中背甲长对体重的直接影响(0.597**)最大,是影响体重的主要因素,其次是背甲宽(0.193**)和体高(0.159**),腹甲长对体重的影响(0.063*)较小;甲桥宽与体重的相关程度很大(0.873),但它与腹甲宽对体重的直接影响都非常小,主要通过其他性状间接影响体重,是影响体重的次要因素,均被剔除;决定系数分析结果与通径分析结果有一致的变化趋势;所选形态性状与体重的复相关指数R2=0.940,说明影响体重的主要自变量指标已经找到,多元回归分析建立了背甲长(X1)、背甲宽(X2)、腹甲长(X4)、体高(X6)对体重(Y)的回归方程,回归截距和相应的回归系数分别是-236.255,2.421,1.188,0.162,1.680;建立回归方程为Y=-236.255+2.421 X1+1.188 X2+0.162 X4+1.680 X6;为乌龟遗传育种提供一定的理论依据和测度指标。     

普通鲤与建鲤MSTN基因比较分析

肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)是动物肌肉发育和生长过程中的负调控因子。采用RACE和基因组步移分别克隆获得了普通鲤MSTN cDNA基因全序列和MSTN基因组序列;普通鲤MSTN cDNA全长2 188bp,共编码375个氨基酸,提交GenBank获得序列登录号GQ214769.1,普通鲤MSTN基因组序列长为3 690bp,包含3个外显子和2个内含子,获得序列登录号GQ214770.1。聚类分析表明,克隆的鲤MSTN为MSTN1a;将普通鲤MSTN与人工育成品种建鲤MSTNs多层次比较,普通鲤MSTN同建鲤MSTN1a在核苷酸水平上的碱基差异位点分别为G(320)A,G(723)A,G(730)A,G(2121)A,A(2794)G,在蛋白水平仅V(78)I替换,暗示了MSTN1a在育种工作中承受的选择压力较大,研究结果为突变位点与鲤生长性能有可能的关联分析奠定基础。     

鄱阳湖乌龟不同组织的同工酶

采用垂直板状聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳技术,分析了乌龟(Chinemys reevesii)的心、脑、眼、肝、胃、肺、小肠、肌肉、脾、性腺10种组织中的酯酶(EST)、乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)和乙醇脱氢酶(ADH)4种同工酶的表达模式,并对其同工酶位点及酶谱表型进行了分析。结果表明,乌龟4种同工酶系统具有不同程度的组织特异性。在心、肝脏、肺、小肠、肌肉和性腺6种组织中检测到EST活性,并在肝脏中检测到7条酶带;LDH酶带多于典型的5条,其中Ldh-1在胃和脾中被检测到,而Ldh-2只在脾中被检测到;MDH具有上清液型(s-MDH)和线粒体型(m-MDH)两种类型,s-MDH型的活性高于m-MDH的活性;ADH中检测到3条酶带,由两个基因位点编码。同工酶的种类与活性的变化与其功能相一致。     

池蝶蚌精子形态及其活力

池蝶蚌精子具有子弹形头部及细长均匀鞭毛尾,属鞭毛型。全长为254.91±20.03μm;头部子弹形,长为32.33±2.15μm,宽为16.60±3.29μm;鞭毛细长均匀,长为216.67±19.73μm。为了更好的计算池蝶蚌精子的存活率,本研究采用曙红Y染色的方法,观察了精子在生理盐水、池塘水和蒸馏水中的存活时间及运动方式。结果显示,精子在生理盐水中的存活时间最长,可达6h;其次是蒸馏水,约为4.5h;最短存活时间是在池塘水中,约为4.0h。池蝶蚌精子的主要运动方式有快速直线游动、弧线运动和原地转动3种方式。快速直线游动的精子活力最高,其次是弧线运动,精子活力降低后进行原地转动。研究的结果对池蝶蚌家系的建立起重要作用。