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以禽流感病毒A/chicken/Hubei/489/2004(H5N1)NA基因全长eDNA克隆pMD-NA为模板,PCR扩增第406位至第1353位基因片段。克隆到pET-28a表达载体,构建重组质粒pET-28/ANA,转化大肠杆菌,用异丙基口硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE和Western blot分析证实,截短的NA重组蛋白获得高效表达。采用SDS-PAGE纯化重组蛋白,免疫家兔,制备特异性神经氨酸酶(NA)抗体。ELISA及间接免疫荧光检测结果显示,该抗体效价在1:1×10^5以上,能与在大肠杆菌和Vero细胞中表达的NA蛋白产生特异性反应。纯化的NA重组蛋白可用作建立禽流感检测方法的诊断抗原,所制备NA抗体可用于检测禽流感基因工程疫苗中的NA抗原组分。 相似文献
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