Neues Verfahren zur photometrischen Bestimmung von Proteasen auf Grund der Reaktion von p-Benzochinon mit Aminogruppen

Zusammenfassung Eine Methode zur Bestimmung von Aminogruppen in Aminen, Aminosäuren und Peptiden wird beschrieben. Sie beruht auf Chinhydronbildung mit p-Benzochinon in Dimethylsulfoxid-Puffer-Lösungen, während Peptidbindungen nicht reagieren. Durch Wahl des geeigneten Substrats kann Spezifität für jede Protease (Pepsin, Trypsin, Chymotrypsin, Carboxypeptidase A, Pronase) erreicht werden. Es können natürliche und synthetische Substrate (Amide, Peptide) verwendet werden. Empfindlichkeit: 100 nMol Aminosäure, 50 nMol Anilin oder 2-Naphthylamin (Mikroverfahren: 20 bzw. 10 nMol).

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New procedure for the photometric determination of proteases, based on the reaction of p-benzoquinone with amino groups

A general method for amino group determination is described. It is based upon quinhydrone formation from p-benzoquinone and amines, amino acids and peptides in buffered dimethylsulphoxide solution. Intact peptide linkages remain unreacted. The method can be adapted for the specific determination of every protease by choice of a suitable substrate (protein, synthetic amide or peptide). Sensitivity: 100 nmoles of amino acids, 50 nmoles of aniline or 2-naphthylamine (micromethod: 20 and 10 nmoles resp.). Enzymes checked: pepsin, trypsin, chymotrypsin, carboxypeptidase A, and pronase.

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Mit Unterstützung der Deutschen Forschungsgemeinschaft.

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Die Arbeit enthält wesentliche Teile der Promotionsschrift von B. Mutschler.

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Direktor: Prof. Dr. U. Ritter.

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Herrn Dr. J. Voss (Institut für organische Chemie der Universität Hamburg) sind wir für die Elementaranalysen zu Dank verpflichtet.