基于核酸适配体荧光标记及荧光共振能量转移检测赭曲霉毒素A

本研究基于荧光共振能量转移(Fluorescence Resonance Energy Transfer, FRET)原理,以荧光素(Fluorescein, FAM)标记的核酸适配体(Aptamer)及猝灭基团(Dabycl)标记的互补链(cDNA)为主体,构建了赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)的荧光标记检测方法。该方法对OTA的检测限为0.01μg/mL,OTA浓度在0.01～0.25μg/mL范围内与荧光强度线性关系良好(R²=0.9991),回收率在86.40%～97.50%之间,可用于实际样品的检测。与传统检测方法酶联免疫吸附剂分析相比,本方法具有检测快速、灵敏度高、特异性强等优点,为食品中对人体有害物质的检测提供了一种新思路。     

腐霉利核酸适配体的筛选与鉴定

本文通过氧化石墨烯-体外指数富集配体系统进化技术，筛选并获得靶向腐霉利的核酸适配体Pr-A06和Pr-A08,通过二级结构预测，两种核酸适配体形成茎环结构和分子内G-四链体，结构稳定。使用胶体金法初步鉴定Pr-A06和Pr-A08,研究结果表明Pr-A06和Pr-A08解离常数(K_d)分别为42.94±8.142 nmol/L、27.01±6.519 nmol/L,亲和力较好，并且特异性良好。Pr-A06浓度在0.1～1μg/mL之间有良好的线性范围，检测限为0.153μg/mL,Pr-A08浓度在0.05～1μg/mL之间有良好的线性范围，检测限为0.115μg/mL。本研究筛选的适配体为腐霉利的快速检测提供了新条件。     

基于双核酸适配体的夹心试纸条法在多菌灵检测中的应用研究

建立了一种胶体金标记核酸适配体的试纸条用于多菌灵的快速检测。将核酸适配体CZ13与AuNPs结合作为信号探针，生物素标记的核酸适配体CZ12固定在链霉亲和素包被膜上作为捕获探针。优化了影响灵敏度的实验条件，如信号探针制备中使用的NaCl和适配体的浓度，检测线上链霉亲和素与生物素标记的核酸适配体的摩尔比等。在最佳实验条件下，多菌灵检测范围为0.5～40μg/mL,检测限为0.45μg/mL。该方法可用于实际样品检测，检测时间为15 min,与果蔬中常见农残不存在交叉反应，方法准确、可靠、使用简便，适合样品的现场快速检测。