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取血浆样品2 mL,加入体积比89∶10∶1的乙腈-水-甲酸混合液4 mL,涡旋,离心。取上清液4 mL,用200 mg C_(18)和100 mg氨丙基粉净化,涡旋,静置后取2 mL上清液,加入4 mL甲醇混匀,氮吹至近干。残渣用体积比80∶20的1.5%(体积分数)甲酸溶液-乙腈的混合液0.5 mL溶解,振荡、过滤后,采用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定滤液中14种氨基酸(脯氨酸、色氨酸、犬尿氨酸、丙氨酸、缬氨酸、甘氨酸、苏氨酸、精氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸)的含量。色谱分析中以InertSustain AQ-C_(18)柱为固定相,以不同体积比的水-乙腈-甲酸的混合液为流动相进行梯度洗脱。质谱分析中采用电喷雾离子源正离子(ESI~+)模式和多反应监测(MRM)模式。结果表明,14种氨基酸的质量浓度在一定范围内与对应的峰面积呈线性关系,测定下限(10S/N)为0.50~2.50μg·L^(-1)。血浆样品在3个浓度水平下进行加标回收试验,回收率为82.3%~102%,测定值的相对标准偏差(n=6)为3.3%~12%。 相似文献
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