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溶胶凝胶膜包埋的胰蛋白酶用于高通量蛋白质肽谱分析 总被引：2，自引：1，他引：1
采用溶胶凝胶包埋法在96孔板中固定胰蛋白酶,制备高通量的酶解反应器。考察了四乙氧基硅烷(TEOS)与甲基三甲氧基硅烷(MTMS)的不同比例对凝胶膜的成胶速度、机械强度、透明度、固定酶的活性及稳定性的影响。以牛血清白蛋白(BSA)为目标蛋白,比较了溶胶凝胶固定化酶与溶液态酶的稳定性和催化活性,用HPLC对BSA的酶解产物进行了肽谱分析,比较了二者的酶解效率。结果表明,TEOS与MTMS比例为1∶1时,凝胶膜有很好的成胶速度、机械强度、透明度;包埋态酶有很高的活性和稳定性。HPLC对肽段的分析结果表明,固定化酶的酶解效率优于溶液态酶。 相似文献
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采用Q-Sepharose FF离子交换柱对初步纯化的Cry1Ab杀虫蛋白样品进行了多次循环精细纯化，洗脱模式为离子强度台阶梯度，流动相为Tris-HCl缓冲液加NaCl，盐浓度从0．1mol·L^-1变化到1．0mol·L^-1．结果表明，Cry1Ab蛋白在NaCl浓度为0．4mol·L^-1时从柱上被洗脱，并与杂蛋白很好地分离．色谱分离机制符合顶替色谱机制．经3次循环分离后可获得高纯度的Cry1Ab蛋白．用SDS-PAGE分析了蛋白的纯度及表观分子量，电泳胶上分离的蛋白进行原住酶切后，用基质辅助激光解析-飞行时间质谱对纯化蛋白进行肽质量谱的分析，Mascot数据库搜索结果确证了该纯化蛋白酶解肽段80％符合已知的Cry1Ab蛋白特征肽段． 相似文献
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