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两种非蛋白氨基酸的新功能: 与丙二醛相互反应的机制 总被引:1,自引:0,他引:1
丙二醛(MDA)是生物分子氧化的典型羰基中间体, 是脂质过氧化的典型终末产物. 这类活性羰基中间体引起组织蛋白的老化与恶化及DNA损伤. 牛磺酸在人体内具有非常广泛的生理功能, 而g-氨基丁酸(GABA)是神经系统的一种重要抑制性神经递质, 因此二者是两种很重要的非蛋白氨基酸. 研究了在生理条件下牛磺酸或GABA是否直接诱捕MDA从而保护组织蛋白不受伤害. 将牛磺酸或GABA与MDA在生理条件下温浴48 h, 经高效液相、质谱等分析手段分析, 发现牛磺酸或GABA与MDA直接反应, 通过HPLC分离, 都生成两种主产物, 一种是没有荧光的紫外吸收峰为274~278 nm 的产物, 一种是有荧光的产物, 这种类似脂褐素(Ex. 392~395 nm/Em. 456~364 nm)的荧光产物是1,4-二氢吡啶衍生物. 牛磺酸或GABA与MDA的反应表明它们在生理条件下具有清除活性羰基的功能, 而这种毒性羰基与很多羰基紧张相关的疾病及衰老有关. 相似文献
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基于磁性颗粒微阵列与双色荧光杂交,建立了单核苷酸多态性(Single nucleoitide polymorphism,SNP)分型方法。将利用不对称扩增得到的含有待检测位点生物素标记的单链PCR产物固定在链亲和素修饰的金磁纳米颗粒(Gold magnetic nanoparticles,GMNPs)表面;将ssDNA-GMNPs混合物点样在底部固定有磁铁的载玻片上构建磁性颗粒微阵列,然后在基因框中与双色荧光探针杂交;杂交完全后,充分洗涤,通过扫描获得分型结果。通过优化不对称PCR的扩增条件,直接扩增出产量较高的单链DNA作为靶序列用于分型。利用本方法对24个样本MTHFR基因的C677T位点多态性进行了检测。实验证明,本方法步骤简单,易实现自动化操作、非常适用于分子诊断与法医鉴定。 相似文献
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化学发光磁酶免疫已经被应用于检测病原体,但是由于针对相应病原体的抗体筛选和修饰等的步骤耗时费力,不适于对多种病原体进行筛查.制备了兔抗大肠杆菌(E.coli)O157:H7的免疫磁性纳米颗粒,富集病原菌后与鼠抗E.coli O157:H7的单克隆抗体形成双抗夹心,采用碱性磷酸酶标记的马抗鼠IgG与单抗结合,加入碱性磷酸酶的化学发光底物试剂3-(2'-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3'-羟基)苯-1,2-二氧杂环丁烷磷酸检测化学发光.实验研究了底物缓冲液、碱性磷酸酶浓度对化学发光强度的影响,比较了NaBH4和甘氨酸对免疫磁珠剩余活性醛基的封闭效果以及本方法检测E.coli O157:H7的特异性和敏感性.结果表明,碱性磷酸酶与底物在c缓冲液中反应的化学发光强度最高,碱性磷酸酶浓度决定了化学发光的强度和持续时间,NaBH4对活性醛基的封闭效果优于甘氨酸,以D群宋内氏志贺氏菌、B群福氏志贺氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和霍乱弧菌及E.coli Top10f'为对照的比较实验显示,该检测方法具有良好的特异性,以1mL的菌液为检测体积时对E.coli O157:H7的检测灵敏度为103cell/mL,整个方法的检测时间约为3h.该方法适用于对多样本进行筛查. 相似文献
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提出了一种应用磁性颗粒和通用连接子扩增技术(Linker-PCR)的多位点单核苷酸多态性(SNP)分型方法. 该方法首先通过酶切将样本基因组DNA打断, 然后将通用连接子通过T4 DNA连接酶与各个酶切片段连接, 利用生物素标记的通用引物将样本进行全基因组扩增. 扩增后, 将生物素标记的Linker-PCR扩增产物固定到亲合素修饰的磁性颗粒表面, 通过与双色荧光标记的等位基因特异性探针杂交, 对待测位点进行分型. 利用该方法, 我们对10个样本MTHFR基因上的2个SNP位点进行了分型, 分型结果准确、正错配信号比大于3. 由于利用Linker-PCR技术来实现对靶序列的全基因组扩增, 该方法非常适用于大量样本的多基因多位点的SNP分型研究. 相似文献
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多孔"类碳糊电极"的羧基化及其对Escherichia ocli O157:H7的检测 总被引:1,自引:0,他引:1
以吡咯为前驱体,羧基化碳纳米管、石墨粉为填料和碳酸钙微球为模板直接诱导合成,制备出一种高灵敏的多孔"类碳糊电极"生物电化学传感器,讨论了羧基化碳纳米管含量、银染时间对检测结果的影响.结果表明,最佳羧基化碳纳米管含量为8%,最佳银染时间为12 min,银的阳极溶出峰电流与E. ocli O157:H7浓度在1.0×104~1.0×106 cells/mL范围内呈线性关系,其线性回归方程为:IP=-5.582+1 972logC,相关系数(R2)为0.9912,检出限为5.1×103cells/mL,实现了对E. ocli O157:H7快速、准确地检测. 相似文献
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