简易超灵敏快速检测H1N1甲型流感病毒方法的研究

基于适配体和滚环扩增(RCA)技术,建立了一种快速、简易、超灵敏检测H1N1甲型流感病毒(IAV)的方法。采用磁珠-SELEX技术筛选,经克隆、测序、合并重复序列,筛选出10条H1N1 IAV候选适配体。通过斑点杂交法、酶联免疫吸附分析法(ELISA)对适配体的结合力、特异性和亲和力进行表征,获得了2条特异性好、亲和力高的线状适配体Apt2和Apt6,并将其环化,制备了环状适配体CApt2和CApt6。以磁性纳米微球表面修饰Apt2捕获富集样品中的H1N1 IAV, H1N1 IAV再结合CApt6,以CApt6作为模板进行RCA扩增,利用纳米金可视化法显示检测结果,对H1N1 IAV的检出限低至100.0 copies/μL。本研究为研发简易、超灵敏、快速检测病毒的方法提供了一种新思路。