合成的人γ-干扰素cDNA在大肠杆菌的高效表达

合成了人γ-干扰素(IFN-γ)cDNA,其特点是选用了大肠杆菌偏爱密码子。将合成基因克隆到含P_L启动子的不同表达载体中,共获得9种不同的表达质粒,它们的SD与起始密码子ATG间的距离(D)不同,在起始翻译区(TIR)的最小自由生成能△G_(f298)~°不同,故其表达量的差异也很大。其中pLY_4-γ_5表达的IFN_γ的量占菌体总蛋白的60％—80％,为国际上所罕见。表达高的原因是由于选择(D)距离适当,△G_(f298)~°较高,以及选用的密码子较好。采用十分简便迅速纯化IFN-γ的方法分离包涵体可达90％以上纯度,再经一步分子筛柱层析,IFN-γ纯度即可达95％以上,比活约2.0×10~7IU/mg。     

STUDY ON THE MECHANISM OF INTERFERON ACTION (Ⅺ)——EFFECT OF pppA2''''p5''''A2''''p5''''A ON THE LEVEL OF cAMP AND cGMP IN MACROPHAGES

In this paper, the increase of cellular cAMP and cGMP levels in macrophages induced bypppA2'p5'A2'p5'A (briefly 2'-5'P_3A_3) is first reported. The optimal concentration of 2'-5'P_3A_3 for the elevation of cellular cGMP to the highest level is 10~(-7)-10~(-6)mol/L, while thatfor cAMP is 10~(-7)mol/L. The time for cGMP to reach its peak value is 15 min and that forcAMP is 2 h, when the cells are treated with 2'-5' P_3A_3 at 10~(-7)mol/L, which is the optimalconcentration for developing biological effect of macrophages (phagocytosis). These resultssuggest that cGMP and cAMP may be related to, or may be the mediators for, 2'-5'P_3A_3action.     

干扰素作用机理的研究——Ⅺ.2′-5′三腺苷酸对巨噬细胞中cAMP和cGMP含量的影响

本研究首次证实了干扰素的作用介质pppA 2'p5'A2'p5'A(2'-5'P_3A_3)能引起巨噬细胞中cGMP,cAMP含量的变化。发现不同浓度的2'-5'P_3A_3和同一浓度的不同作用时间,对细胞内两种环核苦酸的含量有不同的影响。2'-5'P3_A_3的最终浓度在1×10~(-7)—1×10~(-6)mol/L时,可以引起细胞内cGMP显著升高,而使cAMP达到高峰的2'-5'P_3A_3浓度则为1×10~(-7)mol/L。细胞中cGMP与cAMP出现高峰的时间也显著不同,cGMP出现高峰的时间是在加入2'-5'P3_A_3以后15min,而cAMP出现高峰时间则在保温2h之后。上述结果提示,cGMP与cAMP可能与2'-5'P_3A_3受体发挥作用有某种关系。